Transformação de Saacharomyces cerevisiae usando um sistema indutor de retrotranspiraçã (2002)
- Authors:
- Autor USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: O emprego da retrotransformação como veículo para inserção de informação genética nos cromossomos de Saccharomyces cerevisiae foi inicialmente proposto por pesquisadores, que clonaram, em plasmídio bi-funcional, a fusão do retrotransposon Ty1 ao promotor GAL1. Na presença de galactose e em condições de incubação que favorecem eventos de retrotransposição, vários marcadores genéticos de tamanhos variados, entre 40 pb e 2.700 pb, introduzidos internamente neste Ty1 recombinante, são inseridos, no genoma da levedura, por retrotransposição. O presente trabalho teve como objetivo principal a construção de um novo vetor de transformação genética de S. cerevisiae que fosse capaz de promover inserções de múltiplas cópias, no genoma, através da retrotransposição, do cassete de expressão da glicoamilase de Aspergillus awamori de 3,6 Kb, composto pelo seu cDNA (2,0 Kb) sob a regulação do PPGK de S. cerevisiae sem o terminador (1,6 Kb). Para tanto, o cassete de expressão e excreção, contendo seqüência sinal e estrutural da glicoamilase, foi retirado do plasmídio YEpG1 e inserido no sitio de restrição Bam HI do plasmídio pD123, originando o vetor pGTy-Glico. Este novo vetor foi empregado para transformação genética de duas linhagens de S. cerevisiae de coleções de cultura de laboratório: 1784 e GRF-167Em cada evento de transformação, foram obtidas, em média, 500 colônias de leveduras transformantes (ura(-), glicoamilase(+)). Das colônias recombinantes obtidas, foram selecionadas,ao acaso, 100 colônias de cada linhagem, que foram submetidas a condições de cultivo nas quais a retrotransposição foi induzida em dois períodos de tempo diferentes
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2002
- Source:
- Título: Resumos
- Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
-
ABNT
GUERRA, O G e FARIA, Juarez Braz de e VICENTE, Elisabete José. Transformação de Saacharomyces cerevisiae usando um sistema indutor de retrotranspiraçã. 2002, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002. . Acesso em: 14 out. 2024. -
APA
Guerra, O. G., Faria, J. B. de, & Vicente, E. J. (2002). Transformação de Saacharomyces cerevisiae usando um sistema indutor de retrotranspiraçã. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Guerra OG, Faria JB de, Vicente EJ. Transformação de Saacharomyces cerevisiae usando um sistema indutor de retrotranspiraçã. Resumos. 2002 ;[citado 2024 out. 14 ] -
Vancouver
Guerra OG, Faria JB de, Vicente EJ. Transformação de Saacharomyces cerevisiae usando um sistema indutor de retrotranspiraçã. Resumos. 2002 ;[citado 2024 out. 14 ] - Análise de expressão de saccharomyces certvisae através da clonagem de promotores de leveduras selvagem e industrial
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