Estrutura cristalográfica da proteína Thi1 de Arabidopsis thaliana (2002)
- Authors:
- Autor USP: GODOI, PAULO HENRIQUE CONAGGIN - IQSC
- Unidade: IQSC
- DOI: 10.11606/T.75.2002.tde-20082025-171941
- Assunto: FÍSICO-QUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: Com o objetivo de investigar a função biológica do gene thi1 de Arabidopsis thaliana, a estrutura tridimensional da proteína Thi1-P foi determinada até 1,6 'ANGSTROM'de resolução. Descreve-se aqui todo o procedimento experimental realizado, compreendendo as etapas de subclonagem do gene em diversas construções, a expressão heteróloga em Escherichia coli, purificação das proteínas produzidas e de amostras modificadas por digestão enzimática, cristalização, coleta de dados e processamento, cálculo das fases, interpretação dos mapas de densidade eletrônica e refinamento parcial de um modelo molecular. O gene thi1 foi subclonado e expresso em E. coli utilizando diferentes vetores de expressão e modificações da seqüência gênica com o propósito de produzir amostras adequadas à cristalização. Cristais de Thi1-P foram obtidos por difusão de vapor em gota depositada contra uma solução de MES 100 mM, pH6,0, MPD 40% e 1,2,3-heptanotriol 1,5% (w/v). A coleta de dados de cristais de Thi1-P em condições criogênicas foi realizada na linha ID29 do European Synchrotron Radiation Facility (ESRF), buscando otimizar o sinal de dispersão anômala em múltiplos comprimentos de onda (MAD) nas bordas de zinco e platina. A determinação das fases iniciais, por sua vez, somente foi possível pela combinação dos métodos de dispersão anômala em um comprimento de onda (SAD) e modificação da densidade eletrônica no espaço recíproco, utilizando os programas SOLVE e RESOLVE e oconjunto de dados medido no máximo de emissão de fluorescência de zinco (''LAMBDA' =1,28269 'ANGSTROM'). O modelo molecular que descreve a estrutura tridimensional de Thi1-P foi construído utilizando-se o programa ARP/wARP e, por intervenção manual, utilizando o programa O. ) Apesar do refinamento ainda não estar concluído, a estrutura de Thi1-P pode ser descrita na classe a/b, arquitetura do tipo 3-layer (bba) sandwich, com uma topologia semelhante aos domínios de ligação de FAD/NAD(P), contendo um ligante identificado como uma adição de ADP a 4-metil-5-b-hidroxietil tiazol, com um radical ligado na posição C2 do anel de tiazol (ATZ)
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2002
- Data da defesa: 02.09.2002
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
GODOI, Paulo Henrique Conaggin. Estrutura cristalográfica da proteína Thi1 de Arabidopsis thaliana. 2002. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2002. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-20082025-171941/. Acesso em: 12 abr. 2026. -
APA
Godoi, P. H. C. (2002). Estrutura cristalográfica da proteína Thi1 de Arabidopsis thaliana (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-20082025-171941/ -
NLM
Godoi PHC. Estrutura cristalográfica da proteína Thi1 de Arabidopsis thaliana [Internet]. 2002 ;[citado 2026 abr. 12 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-20082025-171941/ -
Vancouver
Godoi PHC. Estrutura cristalográfica da proteína Thi1 de Arabidopsis thaliana [Internet]. 2002 ;[citado 2026 abr. 12 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-20082025-171941/
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