Tese

Expressão, purificação e cristalização de Thi1, proteína envolvida na biossíntese de tiamina e no reparo de lesões de DNA (1998)

• Authors:
  • Godói, Paulo Henrique Conaggin
  • Oliva, Glaucius (Orientador)
• Autor USP: GODOI, PAULO HENRIQUE CONAGGIN - IQSC
• Unidade: IQSC
• Sigla do Departamento: SD
• Subjects: BIOFÍSICA; BIOQUÍMICA; BIOLOGIA MOLECULAR
• Language: Português
• Abstract: Esta dissertação é parte de um projeto de pesquisa no qual pretende-se determinar a estrutura tridimensional da proteína Thil, recentemente identificada, e possivelmente relacionada ao reparo de DNA em Arabidopsis thaliana assim como na biossíntese do anel de tiazol de tiamina (vitamina 'B IND.1'). O mecanismo catalítico desempenhado por essa proteína também deverá ser proposto se possível. O gene thil e sua forma deletada 'delta'N2, sem as bases que codificam para os primeiros 55 aminoácidos, previamente identificados como um peptídeo de translocação para o cloroplasto, foram subclonados em um plasmídeo pET-28 e inseridos imediatamente após uma sequência de 6 histidinas consecutivas. Este procedimento permitiu a expressão em larga escala de ambas as proteínas, entretanto, apenas a proteína deletada pode ser purificada em uma coluna de afinidade contendo íons de níquel imobilizados. A proteína recombinante foi cristalizada a 4 graus C, inicialmente em duas condições diferentes, sendo a mais favorável em tampão Bicina 100mM pH8,8 contendo ('NH IND.4') IND.2 SO IND.4'800 mM, apresentando um hábito de placas finas. Apesar disso, novos experimentos objetivando a melhora do hábito cristalino forneceram resultados favoráveis até o momento e continuam sendo desenvolvidas. A coleta de dados deverá ser feita no próprio laboratório e em fonte de luz síncroton. Devido a falta de homologia com qualquer outra proteína com estrutura tridimensional conhecida, aestratégia a ser adotada para a resolução da estrutura será a de substituição isomorfa, requerendo ao menos dois derivados de átomos pesados da proteína
• Imprenta:
  • Publisher place: São Carlos
  • Date published: 1998
• Data da defesa: 29.04.1998

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How to cite

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• ABNT

  GODÓI, Paulo Henrique Conaggin. Expressão, purificação e cristalização de Thi1, proteína envolvida na biossíntese de tiamina e no reparo de lesões de DNA. 1998. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 1998. . Acesso em: 04 jan. 2026.

• APA

  Godói, P. H. C. (1998). Expressão, purificação e cristalização de Thi1, proteína envolvida na biossíntese de tiamina e no reparo de lesões de DNA (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos.

• NLM

  Godói PHC. Expressão, purificação e cristalização de Thi1, proteína envolvida na biossíntese de tiamina e no reparo de lesões de DNA. 1998 ;[citado 2026 jan. 04 ]

• Vancouver

  Godói PHC. Expressão, purificação e cristalização de Thi1, proteína envolvida na biossíntese de tiamina e no reparo de lesões de DNA. 1998 ;[citado 2026 jan. 04 ]

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