Expressão de uma convertase de Caenorhabditis elegans provavelmente envolvida na vitelogênese de nematóides (2001)
- Authors:
- Autor USP: WINTER, CARLOS EDUARDO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: PARASITOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos: Em Caenorhabditis elegans, dois dos quatro polipeptídeos presentes no vitelo de ovócitos (YP115 e YP88) originam-se do processamento proteolítico do precursor codificado no gene vit-6. O provável sítio de clivagem apresenta um par de aminoácidos básicos, sugerindo um processamento por convertases. KPC-1A, uma das convertases de C. elegans (DNA Cell Biol. 16:663, 1997), ainda não foi caracterizada mas sua sequência é muito similar à da convertase de vitelogenina de Aedes aegypti (PNAS USA 93:6186, 1996)(Winter, 2001; em preparação). Nosso trabalho tem como objetivo expressar KPC-1A recombinante e testar sua atividade em peptídeos sintéticos. Métodos e Resultados: O inserto de um clone de cDNA de KPC-1A (yk335a3, gentilmente cedido pelo Dr. Yugi Kohara, Japão) foi amplificado por PCR e subclonado no plasmídeo de expressão pMAL-p2. A expressão da convertase recombinante foi realizada em células de E. coli DH5a após indução com IPTG. Esse mesmo fragmento está sendo subclonado num plasmídeo onde a inserção estará flanqueada por dois promotores de T7 opostos. Esse plasmídeo recombinante será utilizado em ensaios de RNAi (interferência de RNA) (Nature 391:806, 1998) para análise fenotípica dos vermes que apresentarem o gene de KPC-1A silenciado. Conclusões: O plasmídeo utilizado (pMAL-p2) permite a secreção de proteínas para o espaço periplásmico na conformação nativa. O baixo nível de expressão da proteína recombinante e as dificuldades encontradasna sua purificação, sugerem que a convertase recombinante está sendo expressa na sua forma ativa
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2001
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas
-
ABNT
ANDREONI, J M e WINTER, Carlos Eduardo. Expressão de uma convertase de Caenorhabditis elegans provavelmente envolvida na vitelogênese de nematóides. 2001, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2001. . Acesso em: 19 set. 2024. -
APA
Andreoni, J. M., & Winter, C. E. (2001). Expressão de uma convertase de Caenorhabditis elegans provavelmente envolvida na vitelogênese de nematóides. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Andreoni JM, Winter CE. Expressão de uma convertase de Caenorhabditis elegans provavelmente envolvida na vitelogênese de nematóides. Resumos. 2001 ;[citado 2024 set. 19 ] -
Vancouver
Andreoni JM, Winter CE. Expressão de uma convertase de Caenorhabditis elegans provavelmente envolvida na vitelogênese de nematóides. Resumos. 2001 ;[citado 2024 set. 19 ] - Further analysis of a proteolytic processed vitellogenin from a free-living rhabditid nematode related to c. Elegans
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