Estudos da enzima purina nucleosídeo fosforilase de Schistosoma mansoni (1999)
- Authors:
- Autor USP: PEREIRA, HUMBERTO D' MUNIZ - IQSC
- Unidade: IQSC
- Assunto: FÍSICO-QUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: 0 parasita Schistosoma mansoni, não possui a via de síntese de bases púricas e depende integralmente da via de salvação de purinas para o seu requerimento de purinas. Uma das enzimas, participantes desta via é a Purina Nucleosídeo Fosforilase (PNP) (E.C.2.4.2.1). A PNP cataliza a fosforilase reversível de nucleosídeos de purina para gerar a base correspondente e ribose-1-fosfato. No Projeto Genoma de Schistosoma mansoni, o gene para esta enzima foi identificado. O cDNA parta a PNP de S. mansoni possui 1055pb e codifica para uma proteína de 287 aminoácidos, que possui 49% de identidade sequencial quando comparada à PNP de eritrócitos humana. O gene foi clonado no vetor de expressão pMAL, e uma grande quantidade de proteína de fusão foi produzida (30 mg/L). A proteína de fusão é composta de uma proteína que se liga a maltose (MBP) e a PNP após a purificação da proteína de fusão numa coluna de amilose foi realizada a clivagem das duas proteínas utilizando o fator Xa. O produto de clivagem purificado rendendo cerca de 7mg de PNP pura, a partir de 30mg de proteína de fusão. O 'K IND.M' da SmPNP para a fosforólise de inosina é 6,96 'mü'm, este valor é 6,4 vezes menor ao valor de 45'mü'm da enzima humana, e de 1,6 vezes menor do que o obtido para a bovPNP (11,34'mü'm) pelo mesmo susbtrato testado (inosina). Com relação ao 'k IND.cat.', a enzima humana tem um valor 32 vezes superior a de SmPNP, os valores são 1,78 'seg POT.-1'para a SmPNP e de 57 'seg POT.-1' para a enzimahumana. Cerca de 30mg de SmPNP purificada foram utilizados em experimentos de cristalização (700 condições), e duas condições promissoras foram obtidas, uma utiliza PEG 4000 e 0,1 M de acetato de sódio pH 4,6 e a outra utilizando sulfato de amônio em pHs de 6 a 8. Utilizando o programa Modeller foi construido um modelo tridimensional para a SmPNP tendo como molde as coordenadas da PNP de baço bovino. O modelo mostrou-se razoável quando avaliados ) utilizando critérios de empacotamento e estereoquímicos. 0 modelo revela duas substituições no sítio ativo quando comparado com a PNP humana, esta diferenças poderão ser utilizadas no desenho de inibidores específicos
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 1999
- Data da defesa: 29.10.1999
-
ABNT
PEREIRA, Humberto d'Muniz. Estudos da enzima purina nucleosídeo fosforilase de Schistosoma mansoni. 1999. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 1999. . Acesso em: 02 out. 2024. -
APA
Pereira, H. d'M. (1999). Estudos da enzima purina nucleosídeo fosforilase de Schistosoma mansoni (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. -
NLM
Pereira H d'M. Estudos da enzima purina nucleosídeo fosforilase de Schistosoma mansoni. 1999 ;[citado 2024 out. 02 ] -
Vancouver
Pereira H d'M. Estudos da enzima purina nucleosídeo fosforilase de Schistosoma mansoni. 1999 ;[citado 2024 out. 02 ] - Estrutura da enzima nucleosídeo difosfato quinase (NDPK) de Schistosoma mansoni
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