Mapeamento físico do cromossomo 2 e avaliação do papel do miniexon na virulência de Leishmania major (1998)
- Authors:
- Autor USP: PEREIRA, SIMONE APARECIDA ANTONIAZI - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBQ
- DOI: 10.11606/T.17.1998.tde-18032026-171154
- Subjects: BIOQUÍMICA; LEISHMANIA; GENOMAS; CROMOSSOMOS; TRIPANOSSOMICIDAS; VIRULÊNCIA
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Como parte de um projeto geral para construir o mapa físico do genoma do parasito Leishmania major, este projeto teve como objetivo construir o mapa físico do cromossomo dois (da linhagem clonal LV-39) que contém o gene do miniexon. Este gene é repetido em tandem no genoma de todos os Tripanossomatídeos, sendo fundamental para o processamento de todo e qualquer RNA mensageiro (mRNA), através do mecanismo de "trans-splicing". O mapeamento físico do cromossomo permitiu localizar os clones genômicos que carregam o tandem do referido gene. Esta região foi então utilizada para realizar alguns estudos funcionais, através de transfecção. A amplificação gênica do arranjo do miniexon ocorre em algumas linhagens de Leishmania e já foi sugerido que esta amplificação poderia estar relacionada a uma vantagem de crescimento e exacerbação da virulência da linhagem do parasito (Iovannisci & Beverley, 1989. Mol. Biochem. Parasitol., 34:177-188). Para testar esta hipótese, um clone da região mapeada contendo 40 kb de miniexon (aproximadamente 100 cópias do gene), foi inserido numa linhagem clonal avirulenta de L. major (MHMO/IR/83/LT 252), utilizando-se a técnica de transfecção. Para verificar se esta manipulação alterou o perfil de crescimento ou o padrão de virulência dos clones transfectantes obtidos, avaliou-se o crescimento e o processo de metaciclogênese in vitro, para estes clones. Foi demonstrado que o processo de transfecção não influenciou o padrão de crescimento nem a metaciclogênese dos clones. Para avaliar o padrão de virulência, três clones transfectantes foram injetados, por via subcutânea em animais susceptíveis (BALB/c), em 5 experimentos independentes. A linhagem virulenta LV-39, a linhagem a virulenta CC1 e um clone transfectante contendo somente o vetor cL-HYG foram utilizados como controles. Os estudos foram realizados sob níveis mínimo (16µg/ml) ealto (40µg/ml) de higromicina B para verificar possíveis alterações no padrão de virulência in vivo. Sob estas condições somente um dos clones transfectantes mostrou aumento significante de virulência, quando comparado a linhagem parental avirulenta. Os níveis de RNA destes transfectantes foram determinados e o aumento no nível de expressão do miniexon foi evidente sob 40µg/ml de pressão por higromicina B. Para testar se este efeito está relacionado à presença das cópias extra de miniexon foram obtidos clones "curados" a partir dos transfectantes originais, através de um ensaio de diluição limitante. A ausência da molécula foi confirmada por hibridação em "Southern Blot" contendo os clones curados. Os experimentos in vivo com estes clones sugerem que a alteração de virulência não está relacionada à presença de um maior número de cópias do miniexon
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 1998
- Data da defesa: 22.06.1998
- Status:
- Nenhuma versão em acesso aberto identificada
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ABNT
ANTONIAZI, Simone Aparecida. Mapeamento físico do cromossomo 2 e avaliação do papel do miniexon na virulência de Leishmania major. 1998. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 1998. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-18032026-171154/. Acesso em: 07 maio 2026. -
APA
Antoniazi, S. A. (1998). Mapeamento físico do cromossomo 2 e avaliação do papel do miniexon na virulência de Leishmania major (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-18032026-171154/ -
NLM
Antoniazi SA. Mapeamento físico do cromossomo 2 e avaliação do papel do miniexon na virulência de Leishmania major [Internet]. 1998 ;[citado 2026 maio 07 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-18032026-171154/ -
Vancouver
Antoniazi SA. Mapeamento físico do cromossomo 2 e avaliação do papel do miniexon na virulência de Leishmania major [Internet]. 1998 ;[citado 2026 maio 07 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-18032026-171154/
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