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Estudos estruturais da endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis (1998)

  • Authors:
  • Autor USP: CARDOSO, ROSA MARIA FERNANDES - IQSC
  • Unidade: IQSC
  • Sigla do Departamento: SD
  • Subjects: BIOFÍSICA; BIOQUÍMICA
  • Language: Português
  • Abstract: A endopeptidase glutamato-específica de Bacillus lichemformis (GSE-BI) pertence à família das serino-proteases tipo tripsina e catalisa seletivamente a hidrólise de ligações peptídicas, no lado C-terminal dos resíduos de glutamato. O objetivo final deste projeto é compreender melhor a base estrutural da especificidade das endopeptidases para glutamato. A GSE-BI foi purificada por meio de uma variação no procedimento de Svendsen e Breddam. Análises das amostras da GSE-BI por SDS-PAGE e HPLC, sugerem a ocorrência de autólise sobre a influência do SDS e/ou do aquecimento das amostras, pelo menos até 37 graus C. Monocristais da GSE-BI foram obtidos pelo método de difusão de vapor com a gota suspensa, utilizando PEG 3400 à 18% em tampão acetato 0,1 M pH 4,6. O processamento dos dados de difração de raios-X revelou que GSE-BI cristalizou no grupo espacial 'P2 IND.1' com a = 63, 42 'A SOB.o', b = 79,39 'A SOB.o', c = 90,16 'A SOB.o' e 'beta'- 90,04 graus. A completeza dos dados é de 89,6% com 'R IND. merge' de 9,2% até 2,3 'A SOB.o' de resolução. Cálculos de conteúdo de solvente sugerem a existência de quatro monômeros da GSE-BI na unidade assimétrica. Tentou-se solucionar o problema das fases com o método de substituição molecular, todavia, sem sucesso, possivelmente devido à baixa similaridade estrutural dos modelos com a GSE-BI. Buscando obter informações a respeito do enovelamento da GSE-BI, foram realizadas medidas de dicroísmo circular, em tampão Tris-Fosfato 20mM pH 8,08 e em água, e medidas no infravermelho, com a proteína em pastilha com KBr. Os resultados puderam ser comparados com a definição de estrutura secundária, gerada a partir de um modelo estrutural teórico da GSE-BI, revelando, como esperado, um enovelamento dominado por fitas 'beta' antiparalelas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 04.05.1998

  • How to cite
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    • ABNT

      CARDOSO, Rosa Maria Fernandes; GARRATT, Richard Charles. Estudos estruturais da endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis. 1998.Universidade de São Paulo, São Carlos, 1998.
    • APA

      Cardoso, R. M. F., & Garratt, R. C. (1998). Estudos estruturais da endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis. Universidade de São Paulo, São Carlos.
    • NLM

      Cardoso RMF, Garratt RC. Estudos estruturais da endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis. 1998 ;
    • Vancouver

      Cardoso RMF, Garratt RC. Estudos estruturais da endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis. 1998 ;

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