Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2 (2014)
- Autores:
- Autor USP: ZAPATA, LARA MARTINELLI - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Assuntos: CÉLULAS-TRONCO; DIFERENCIAÇÃO CELULAR; IMUNOLOGIA CELULAR
- Idioma: Português
- Resumo: Estudos anteriores em nosso laboratório mostraram que células-tronco hematopoéticas primitivas de cordão umbilical (CTH) expressam altos níveis de fatores de transcrição (FTs) relacionados à hematopoese primitiva e auto-renovação. Foram identificados componentes chaves da via não-canônica de NF-kB (incluindo as subunidades RELB and NF-kB2), sugerindo que essa via seria responsável por algumas das características intrínsecas primitivas dessas células. Enquanto que o papel da via não-canônica de NF-kB em CTH na auto-renovação foi posteriormente confirmada por outros, seu papel em células-tronco embrionárias (CTEs) ainda permanece desconhecido. CTEs possuem o potencial de auto-renovação, além da habilidade de originar células dos três folhetos embrionários, conferindo-lhes um grande potencial terapêutico. Com isso em mente, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel da via NF-kB na pluripotência e diferenciação em células pluripotentes. Nós avaliamos a modulação transcricional dos componentes centrais envolvidos em ambas as vias de NF-kB: a clássica ou canónica (mediada pelos componentes RELA e NF-kB1 e a não-canônica ou constitutiva (mediada por RELB e NF-kB2). Para isso, nós utilizamos a linhagem pluripotente de carcinoma embrionário NTera-2. 1 x‘10 POT.6’ células por poço foram semeadas em placas de 6 poços e cultivadas em DMEM suplementado com 10% SFB. Após 24 horas, as células foram tratadas com ácido retinóico (atRA; 10 µM), indutor de diferenciação, por 2, 4 e 8 dias. Células NTera-2 sob as mesmas condições de cultivo, porém sem atRA, foram usadas como controle. O experimento foi realizado em triplicaras. Seguidas a extração de RNA (método Trizol) e a transcrição reversa, os transcritos foram analisados por PCR em tempo real. As analyses estatísticas foram realizadas usando o teste ANOVA seguido de Tukey pelo software GraphPad Prism 5(as diferenças foram consideradas significativas quando p<0.05). Sob diferenciação, a expressão de RELA e NF-kB1 foi induzida (quando comparada aos respectivos controles), atingindo a significância estatística no 8º dia após o tratamento com atRA. Ao contrário, os níveis dos transcritos RELB e NF-kB2 foram reduzidos, atingindo a significância estatística já no 4º dia. Os genes LIF e LIN-28 apresentaram um padrão de expressão similar ao de RELB e NF-kB2, em contrapartida, a expressão de STAT 3A e STAT 3B foi praticamente constante, não havendo variação significativa entre os níveis de expressão no grupo controle e tratado, com excessão do 4° dia de tratamento. As tendências contrárias observadas para os FTs chaves das vias canónica e não-canônica de NF-kB durante a diferenciação da linhagem Ntera-2 sugerem seu envolvimento em dois processos distintos: a via canónica regulando a diferenciação e a não-canônica atuando na manutenção da pluripotência
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2014
- Data da defesa: 12.06.2014
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ABNT
ZAPATA, Lara Martinelli. Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Zapata, L. M. (2014). Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Zapata LM. Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. 2014 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Zapata LM. Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. 2014 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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