Estudos estruturais da Seril-tRNA Sintetase nativa e em interação com tRNAs cognatos de <i>Trypanosoma brucei</i> (2014)
- Autores:
- Autor USP: MARTIL, DAIANA EVELIN - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- Assuntos: ENZIMAS (ESTUDO;ESTRUTURA); PROTEÍNAS (SÍNTESE); RNA; TRYPANOSOMA
- Palavras-chave do autor: Selenocisteína; Seril-tRNA sintetase; tRNA<sup>Sec</sup>; tRNA<sup>Ser</sup>
- Idioma: Português
- Resumo: A síntese de selenocisteína e sua incorporação co-traducional em selenoproteínas como resposta a um códon UGA em fase requerem uma complexa maquinaria molecular. Em eucariotos, foram identificados componentes que participam da reação de formação de selenocisteína: Seril-tRNA sintetase (SerRS), O-fosfoseril-tRNA quinase (PSTK), SECIS Binding Protein 2 SBP2, um fator de elongação específico para Sec (EFSec), selenofosfato sintetase 1 (SPS1) e selenofosfato sintetase 2 (SPS2), SEPSECS, proteína ligante de RNA SECp43, proteína ribossomal L30, um tRNA de inserção de selenocisteína (tRNASec, SELC) e uma sequência específica no RNA mensageiro (elemento SECIS). O primeiro passo da incorporação de selenocisteína em proteínas é realizado pela SerRS, que aminoacila o tRNA com serina através da ativação da serina por Mg+2 e ATP, levando a formação de um intermediário ligado a enzima (Ser-AMP). Posteriormente, ocorre a mudança do radical Ser do intermediário Ser-AMP para o tRNASec, e subsequentemente, a conversão enzimática de Ser-tRNASec para Sec-tRNASec. Através de análises in sílico nosso grupo identificou componentes da maquinaria de inserção de selenocisteína em espécies de Kinetoplastida. Foram identificados homólogos de tRNASec e as enzimas TbSerRS, TbSPS2, TbPSTK, TbSepSecS e TbEFSec. Nosso principal alvo é o estudo estrutural da SerRS de Trypanosoma brucei nativa e em complexo com o tRNASec e com as isoformas do tRNASer. Uma nova metodologia no processo de purificação destaenzima foi desenvolvida e, através das técnicas de cromatografia de exclusão molecular, espalhamento de luz dinâmico e ultracentrifugação analítica conseguimos determinar o estado oligomérico da TbSerRS. O resultado de dímeros em solução corroborou com dados reportados na literatura, além de verificarmos por meio de estudos de cinética enzimática que a enzima encontra-se ativa sob as condições utilizadas. A técnica de ultracentrifugação analítica de sedimentação em equilíbrio também nos permitiu verificar a formação do complexo SerRS-tRNA, mas não nos possibilitou definir a estequiometria deste complexo. Estudos estruturais da enzima nativa e em interação com os tRNAs SELC e com as isoformas do tRNASer, L-serina, um análogo não hidrolisável de AMP, MgCl2, e com porções menores dos tRNAs foram realizados por meio da cristalografia por difração de raios X. Através dessa técnica, dezessete conjunto de dados foram coletados, processados e estão em fase de refinamento. Algumas análises estruturais possibilitaram confirmar a presença de duas moléculas de glicerol em cada monômero na região do sítio ativo para a estrutura da TbSerRS nativa e uma molécula de dAMP para o complexo TbSerRS-dAMP
- Imprenta:
- Local: São Carlos
- Data de publicação: 2014
- Data da defesa: 17.04.2014
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ABNT
MARTIL, Daiana Evelin. Estudos estruturais da Seril-tRNA Sintetase nativa e em interação com tRNAs cognatos de <i>Trypanosoma brucei</i>. 2014. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-161157/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Martil, D. E. (2014). Estudos estruturais da Seril-tRNA Sintetase nativa e em interação com tRNAs cognatos de <i>Trypanosoma brucei</i> (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-161157/ -
NLM
Martil DE. Estudos estruturais da Seril-tRNA Sintetase nativa e em interação com tRNAs cognatos de <i>Trypanosoma brucei</i> [Internet]. 2014 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-161157/ -
Vancouver
Martil DE. Estudos estruturais da Seril-tRNA Sintetase nativa e em interação com tRNAs cognatos de <i>Trypanosoma brucei</i> [Internet]. 2014 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-31072014-161157/
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