Investigação do papel da proteína ribossômica L19 no controle da expressão de genes em Leishmania (2011)
- Autores:
- Autor USP: BIZZO, JANAYNA HAMMES DE ALMEIDA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Assuntos: LEISHMANIA; PROTEÍNAS; RIBOSSOMOS; EXPRESSÃO GÊNICA
- Idioma: Português
- Resumo: O gene da proteína ribossômica L19 (RPL19) foi identificado em nosso laboratório como um transcrito amastigota-preferencial. Visto que diversos estudos recentes demonstram uma série de funções extra-ribossômicas para estas proteínas, neste trabalho investigamos a função da RPL19 no controle da expressão de genes específicos em Leishmania. Inicialmente geramos o vetor pNEO-L19, o transfectamos em L. major e em L. braziliensis e constatamos que a sua superexpressão pelos clones levou a um retardo no crescimento, comparativamente às linhagens parentais. No transfectante de L. major os níveis de tradução detectados foram muito superiores ao da linhagem parental. A partir desses transfectantes foram obtidos clones curados do plasmídeo que apresentaram reversão parcial no crescimento. Por eletroforese bidimensional comparamos os perfis protéicos de L. major superexpressora de RPL19 com o controle e 33 proteínas diferencialmente expressas foram identificadas. Não identificamos elementos conservados nas regiões não traduzidas (UTRs) dos transcritos correspondentes que pudessem indicar mecanismos de regulação similar ou comum. Entretanto é coerente a detecção da expressão aumentada de proteínas envolvidas na tradução e no enovelamento de proteínas, visto que a superexpressão da RPL19 levou a um grande aumento nas taxas de tradução. Por pull-down, confirmamos a interação de uma das proteínas identificadas, a Enolase, com a RPL19. Para a produção de anticorpo anti-RPL19 clonamos a sequência do gene RPL19 no vetar pET28a de expressão em E. coli, inserindo 6-Histidinas na extremidade N-terminal. A proteína recombinante His-L19, superexpressa em E. coli, foi utilizada para a imunização de coalhas. Os anticorpos produzidos reconheceram as isoformas da RPL19 endógena de L. major. A variação da expressão do transcrito de L19 ocorre segundo um padrão espécie-especifico. Por outro lado, a proteína obedeceao mesmo padrão de expressão em todas as espécies analisadas: no inicio da fase log é encontrada em altos níveis que decaem na fase estacionária. Ao contrário dos níveis de transcritos, a expressão da proteína L19 é menor nos amastigotas que nos promastigotas de L. major. A RPL19 apresentou-se largamente distribuída em grânulos por todo o citoplasma dos promastigotas e aparentemente ausente no núcleo e cinetoplasto. Por Racionamento subcelular identificamos que a RPL19 é predominantemente encontrada na fração ribossômica, mesmo a isoforma expressa a partir do plasmídeo. Aliado a outros indícios, acreditamos que este excesso de RPL19 nos transfectantes também se associe aos ribossomos, mantendo-o mais estável durante o processo de tradução. Em paralelo ao nosso objetivo central, verificarmos a infecção experimental de melanócitos murinos com L. braziliensis e L. donovani. Estes resultados são inéditos e de provável relevância no processo de infecção natural. Caracterizamos a cinética de infecção, condições de infecção das células e coleta dos amastigotas e estão em progresso a caracterização dos amastigotas-símile
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2011
- Data da defesa: 18.04.2011
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ABNT
ALMEIDA BIZZO, Janayna Hammes de. Investigação do papel da proteína ribossômica L19 no controle da expressão de genes em Leishmania. 2011. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Almeida Bizzo, J. H. de. (2011). Investigação do papel da proteína ribossômica L19 no controle da expressão de genes em Leishmania (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Almeida Bizzo JH de. Investigação do papel da proteína ribossômica L19 no controle da expressão de genes em Leishmania. 2011 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Almeida Bizzo JH de. Investigação do papel da proteína ribossômica L19 no controle da expressão de genes em Leishmania. 2011 ;[citado 2024 abr. 19 ]
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