Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de diferentes tecidos de vacas infectadas experimentalmente com a cepa 2308 (2009)
- Autores:
- Autor USP: VEJARANO RUIBAL, MARIA DEL PILAR - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Assuntos: VACAS; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; PATOGENIA ANIMAL; BRUCELOSE ANIMAL (EPIDEMIOLOGIA); TUBERCULOSE (EPIDEMIOLOGIA)
- Idioma: Português
- Resumo: Este estudo comparou o desempenho de quatro protocolos de extração de DNA a partir de homogeneizados de diferentes órgãos provenientes de vacas infectadas experimentalmente com a B. abortus 2308. Os protocolos de extração comparados foram o método de GT (lise com isotiocianato de guanidina), Boom (lise com GT e tratamento com suspensão carreadora Diatomaceous earth), PK (lise com proteinase K) e Santos (lise por fervura e congelamento com nitrogênio líquido). Foram constituídos os grupos padrão ouro positivo e negativo baseados na bacteriologia clássica e compostos por: 54 cotilédones (27 pos. e 27 neg.), 39 linfonodos supra mamários (12 pos. e 27 neg.), 44 pré-escapulares (17 pos. e 27 neg.), 33 fígados (6 pos. e 27 neg.), 37 baços (10 pos. e 27 neg.), e 34 úberes (7 pos. e 27 neg.). Todas as amostras foram submetidas aos quatro protocolos de extração e a um mesmo processo de amplificação com os primers B4 e B5. Nos resultados consolidados por órgãos, a proporção de positivos no cotilédone foi maior do que a encontrada no linfonodo supramamário (p=0,0001), linfonodo pré-escapular (p<0,0001), fígado (p=0,0006), baço (p<0,0001) ou úbere (p=0,0019). Os resultados acumulados para os métodos de extração mostraram que o protocolo de Santos teve maior sensibilidade relativa do que o método de Boom (p=0,003) e GT (p=0,0506), e foi igual ao PK (p=0,2969). As demais comparações de proporções não resultaram em diferenças estatisticamente significantes. No estudo verificou-se amostas positivas a PCR e negativas ao isolamento e viceversa. Assim, apesar das desvantagens do método bacteriológico clássico, a melhor estratégia para o diagnóstico direto da infecção de vacas por B. abortus em homogeneizado de órgãos é a utilização conjunta do isolamento e da PCR, examinando os cotilédones e utilizando os métodos de extração de DNA Santos ou PK.
- Imprenta:
- Data da defesa: 19.06.2009
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ABNT
VEJARANO RUIBAL, Maria Del Pilar. Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de diferentes tecidos de vacas infectadas experimentalmente com a cepa 2308. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2009. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-13072009-111831/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Vejarano Ruibal, M. D. P. (2009). Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de diferentes tecidos de vacas infectadas experimentalmente com a cepa 2308 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-13072009-111831/ -
NLM
Vejarano Ruibal MDP. Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de diferentes tecidos de vacas infectadas experimentalmente com a cepa 2308 [Internet]. 2009 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-13072009-111831/ -
Vancouver
Vejarano Ruibal MDP. Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de diferentes tecidos de vacas infectadas experimentalmente com a cepa 2308 [Internet]. 2009 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-13072009-111831/
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