Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória (2005)
- Authors:
- Autor USP: REBOUCAS, NANCY AMARAL - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: A secreção de prótons em túbulos proximais, que se faz principalmente por NHE3, esta ativada na acidose. Nosso objetivo e verificar se há aumento da expressão de mRNA e proteína-NHE3 e na atividade de diferentes segmentos do promotor do gene do NHE3 em células de túbulos proximais renais de opossum (OKP) submetidas a acidoses metabólica e respiratória. Métodos e Resultados: Células OKP foram submetidas a acidose por 24 horas, acidificando o meio a pH 6,9 com HCl (acidose metabólica), ou aumentando pressão parcial de CO2 (pCO2), de 40 mmHg (controle) para 80 mmHg (acidose respiratória). Apos esse período, as células eram utilizadas para extração de RNA total, utilizando Trizol (Invitrogen). Esse RNA total, apos remoção do DNA contaminante, foi utilizado para síntese da primeira fita de cDNA, utilizando como iniciadores octameros de aleatórios de deoxinucleotideos, e a transcriptase reversa SuperScript 3 (Invitrogen). Para PCR com quantificação do produto amplificado em tempo real, foram utilizados primers e sondas específicos para NHE3 e para beta-actina, esta utilizada como controle interno. A quantificação resultou em aumento da expressão de mRNA-NHE3 tanto na acidose metabólica, aumento de 3,6 vezes, como na acidose respiratória, aumento de 3,8 vezes (n=5). Para avaliar os efeitos da acidose sobre o promotor do NHE3, dois segmentos da região flanquedora 5' do gene NHE3 e parte do primeiro exon, correspondente as posições de -2.095 ate +55,e de -152 ate +55, foram clonados no vetor pGL3 e transfectados em células OKP. ) Após a transfecção, as células foram incubadas por 48 horas em meio com pH 6,9, acidificando com HCl e, em seguida, lisadas para quantificação da proteína codificada pelo gene reporter Firefly luciferase. Como controle da eficiência da transfecção utilizamos vetor contendo o gene reporter Renilla luciferase. A acidificação do meio resultou em aumento de 31% (p< 0,001) na atividade do promotor quando o segmento transfectado foi de -152 a +55. Com o segmento maior, -2.095 a +55, que em condições basais foi cerca de dez vezes menos ativo que o anterior, não observamos aumento significativo na atividade de luciferase apos incubação em meio acido. Conclusões: Nossos resultados sugerem que tanto acidose metabólica como respiratória são capazes de induzir aumento dos níveis de mRNA-NHE3 em células OKP. O segmento da região promotora correspondente as posições -152 a +55 foi responsivo a acidificação do meio. Com o segmento maior, -2095 a +55 não foi possível observar aumento da atividade do promotor em meio acido, muito provavelmente devido a existência de fostes elementos repressores presentes entre as posições -2095 a - 152.
- Imprenta:
- Publisher: Federação de Sociedades de Biologia Experimental
- Publisher place: Águas de Lindóia, São Paulo
- Date published: 2005
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental, FeSBE
-
ABNT
SILVA, P. H. I. e REBOUÇAS, Nancy Amaral. Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória. 2005, Anais.. Águas de Lindóia, São Paulo: Federação de Sociedades de Biologia Experimental, 2005. . Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Silva, P. H. I., & Rebouças, N. A. (2005). Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória. In Resumos. Águas de Lindóia, São Paulo: Federação de Sociedades de Biologia Experimental. -
NLM
Silva PHI, Rebouças NA. Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória. Resumos. 2005 ;[citado 2024 abr. 26 ] -
Vancouver
Silva PHI, Rebouças NA. Modulação transcricional do gene da isoforma 3 do permutador Na+/H+ (NHE3) nas acidoses metabólica e respiratória. Resumos. 2005 ;[citado 2024 abr. 26 ] - Modulacao da expressao da isoforma 3 do trocador 'NA POT.+' / 'H POT.+' (Nhe-3) em tecido renal de ratos por paratormonio
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