Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina (1999)
- Authors:
- Autor USP: BARUFFI, MARCELO DIAS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RPM
- Assunto: IMUNOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: MNCF ("Macrophage-derived Neutrophil Chemotactic Factor") é uma lectina indutora da migração de neutrófilos, isolada por adsorção à D-galactose imobilizada do sobrenadante de monocamadas de macrófagos peritoneais de rato, estimulados com LPS. Sua atividade tem pelo menos duas peculiaridades: estar manifesta mesmo quando ensaiada em animais pré-tratados com dexametasona a ser inibida em presença de D-galactose. A observação que MNCF também é produzido por células de linhagem macrofágica de camundongos e a produção de anticorpo monoclonal anti-MNCF, descritas neste, trabalho, viabilizaram a abordagem de novos aspectos nas investigações sobre o MNCF, referentes às características fisicas da molécula, ao estabelecimento de analogias com proteínas conhecidas, à interação com ligante na superficie do neutrófilos e à ligação com glicoproteína da matriz extracelular. MNCF, isolado por cromatografia de afinidade em agarose-D-galactose, a partir do sobrenadante demacrófagos de rato (MNCF-r) ou de células da linhagem P388-D1 de camundongos (MNCF-c), caracteriza-se por ter massa molecular aparente de 69 kDa, pI 6,6-6,8 a sequência de aminoácidos N-terminais (EAHKSEIAHRFKDLG). O MNCF de camundongo tem atividades biológicas similares às do MNCF de rato. MNCF-r a MNCF-c induzem migração de neutrófilos em ambas espécies ensaiadas, ratos a camundongos, mesmo quando esses animais-teste, são pré-tratados com dexametasona; a atividade exercida invivo pelo MNCF-c é inibida em45% na presença de D-galactose. MNCF-r e MNCF-c induzem migração in vitro de neutrófilos humanos, por mecanismo haptotático ; essa atividade é inibida significantemente na presença de Dgalactose. MNCF-r purificado foi utilizado para a produção de anticorpos policlonais a monoclonais em camundongos. Este anticorpo monoclonal, denominado B4.1 reconhece MNCF-r, tem cadeias pesada gama 3 e leve Kappa, foi capaz de asorver a atividade atraente de neutrófilos de ) uma preparação de MNCF-r a de revelar a presença de MNCF ligado a superfície de neutrófilos. A ligação de MNCF-r à superfície de neutrófilos foi analisada por citometria de fluxo, estimando-se um número médio baixo de ligantes por célula. O MNCF-r foi deslocado da superfície de neutrófilos pela adição de D-galactose (0,3 M) ao meio. Constatou-se através de ensaio em microplacas que MNCF-r a MNCF-c ligam-se à laminina, glicoproteína de matriz extracelular, abundante em membrana basal vascular; essa interação é inibida em presença de Dgalactose e pode estar implicada na formação de gradiente haptotatico de MNCF-r/MNCF-c, aparentemente requerido para que fator induza m graçâo de neutrófilos vivo. Com base imuno reatividade cruzada sequência N- terming? alto grau de identidade atividade gica comum estabelecera analogias entre MNCFr/MNCF c proteínas conhecidas. Assim avaliaram-se similaridades e diferenças do MNCF-c com P70 do cérebro de ratos, receptor de lâminina de S aureus galectina-3. O compartilhamento deepitopos ficou evidente todos casos, mas não se constatou correspondência entre MNCF qualquer das proteínas citadas. O conjunto de novas observações feitas sobre MNCF as ferramentas agora disponibilizadas para seu estudo justificam e viabilizam investimento que doravante será feito nos procedimentos de clonagem molecular do fator
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 1999
- Data da defesa: 16.09.1999
-
ABNT
BARUFFI, Marcelo Dias; BARREIRA, Maria Cristina Roque Antunes. Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. 1999.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 1999. -
APA
Baruffi, M. D., & Barreira, M. C. R. A. (1999). Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Baruffi MD, Barreira MCRA. Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. 1999 ; -
Vancouver
Baruffi MD, Barreira MCRA. Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. 1999 ; - Dimeric galectin-1 induces surface exposure of phosphatidylserine and phagocytic recognition of leukocytes without inducing apoptosis
- Vivência acadêmica no setor de Análises Clínicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Rbeirão Preto
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- Vivência acadêmica no setor de Análises Clínicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto
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- Vivência acadêmica no Setor de Análises Clínicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto
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