Investigação da citotoxicidade de análogos de timidina utilizados para monitoramento da replicação do DNA em tripanosomatídeos (2025)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, MARCOS ANTONIO FERNANDES DE - IQ
- Unidade: IQ
- DOI: 10.11606/D.46.2025.tde-18032026-123527
- Subjects: REPLICAÇÃO DO DNA; PROTOZOA; TRYPANOSOMA CRUZI; ANTICORPOS
- Keywords: BrdU; BrdU; DNA replication; EdU; EdU; Replicação do DNA; Toxicidade; Toxicity; Tripanosomatídeos; Trypanosomatids
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Os análogos de timidina BrdU (5-bromo-2’-desoxiuridina) e EdU (5-etinil-2’-desoxiuridina) são amplamente utilizados no monitoramento da replicação do DNA de diversos organismos. Contudo, trabalhos recentes têm evidenciado certa toxicidade destes compostos em células de mamíferos, o que pode levar ao enviesamento de dados. Em tripanosomatídeos (protozoários parasitos), até o momento não há pesquisas publicadas que tenham avaliado a toxicidade destes análogos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos citotóxicos de BrdU e EdU em Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei e Leishmania major. Para isso, tratamos os referidos tripanosomatídeos com diferentes concentrações de BrdU/EdU (10, 50 e 100 µM). Avaliamos a capacidade proliferativa, viabilidade celular, conteúdo de DNA por citometria de fluxo, presença de dano no DNA por IFA utilizando α-γH2A, e incorporação/presença dos respectivos análogos. In silico, verificamos detalhadamente a as estruturas de BrdU/EdU por meio da elaboração de um potencial eletrostático molecular (MEP) e possíveis alterações estruturais no DNA utilizando Dinâmica Molecular (DM). Em T. cruzi, observamos redução da proliferação e da viabilidade para os grupos tratados com EdU ao longo do tempo, enquanto BrdU não apresentou alterações. Em relação ao conteúdo de DNA, verificamos que EdU gerou acúmulo de células na fase S após 72 h de recuperação, enquanto BrdU não causou alterações.Curiosamente, EdU permaneceu incorporado no DNA, mesmo após 72 h de sua retirada. Verificamos também que a sinalização de dano no DNA é intensificada pela presença de EdU, mas não BrdU. Para T. brucei, observamos uma redução tardia na capacidade proliferativa para EdU, mas não para BrdU. Verificamos redução da viabilidade para as maiores concentrações de EdU após 24 h de incorporação, com posterior recuperação. Para o conteúdo de DNA, observamos um aumento da população em sub-G1 para BrdU e discreto aumento de S para EdU após 72 h de recuperação. Nos ensaios IFA para verificação de γH2A, verificamos que a presença de ambos os análogos gera diferenças muito sutis. Em L. major, observamos uma diminuição da densidade parasitária e da viabilidade nos grupos tratados com EdU, com posterior recuperação 72 h após a remoção do análogo. Não houve alterações significativas com BrdU. Isso foi refletido nas análises do conteúdo de DNA. Além disso, observamos aumento de γH2A após 24 h e sutil diminuição após 72 h de recuperação em resposta ao EdU, mas não BrdU. Por fim, nossas análises in silico indicam alterações na polaridade de EdU em relação a dT (2-desoxitimidina) e BrdU, o que sugere maior reatividade de EdU devido ao grupo etinil.Também observamos que a presença de BrdU/EdU no DNA gera desestabilização da dupla hélice, revelada pelo aumento da flutuação e alteração no número de ligações de hidrogênio entre as bases, alterações nas torções nos ângulos diedros da estrutura dupla hélice e aumento do deslocamento global dos átomos do DNA. Juntos, nossos achados sugerem que EdU possui um potencial cito e genotóxico muito maior que BrdU para os tripanosomatídeos. Além disso, as respostas aos danos no DNA gerados pela presença de EdU nestes organismos aparentam ser espécie-específicas.
- Imprenta:
- Data da defesa: 14.11.2025
- Status:
- Nenhuma versão em acesso aberto identificada
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ABNT
OLIVEIRA, Marcos Antonio Fernandes de. Investigação da citotoxicidade de análogos de timidina utilizados para monitoramento da replicação do DNA em tripanosomatídeos. 2025. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18032026-123527/. Acesso em: 14 abr. 2026. -
APA
Oliveira, M. A. F. de. (2025). Investigação da citotoxicidade de análogos de timidina utilizados para monitoramento da replicação do DNA em tripanosomatídeos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18032026-123527/ -
NLM
Oliveira MAF de. Investigação da citotoxicidade de análogos de timidina utilizados para monitoramento da replicação do DNA em tripanosomatídeos [Internet]. 2025 ;[citado 2026 abr. 14 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18032026-123527/ -
Vancouver
Oliveira MAF de. Investigação da citotoxicidade de análogos de timidina utilizados para monitoramento da replicação do DNA em tripanosomatídeos [Internet]. 2025 ;[citado 2026 abr. 14 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18032026-123527/
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