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Tese

Preparo de materiais monolíticos para extração em fase sólida e colunas de separação aplicadas a proteínas (2025)

  • Authors:
  • Autor USP: VITEK, RENAN - IQ
  • Unidade: IQ
  • DOI: 10.11606/T.46.2025.tde-18032026-124931
  • Subjects: MATERIAIS POROSOS; CROMATOGRAFIA; PROTEÍNAS
  • Keywords: Chromatographic techniques; Extração em fase sólida; Monoliths; Monolitos; Proteínas; Proteins; Solid-phase extraction; Técnicas cromatográficas
  • Agências de fomento:
  • Language: Português
  • Abstract: Monolitos são materiais porosos com canais interconectados que permitem o fluxo de soluções, tornando-os candidatos para aplicações em técnicas de separação. Dentre estas, a extração em fase sólida (SPE) se destaca com um grande número de trabalhos com monolitos. Assim, esta tese descreve trabalhos com o objetivo de sintetizar diferentes monolitos para aplicações em análises de proteínas. O primeiro deles visou quantificar mioglobina urinária utilizando colunas monolíticas poliméricas, produzidas por copolimerização de estearil metacrilato (SMA) e etileno glicol dimetacrilato (EDMA). As colunas foram preparadas em tubos de etileno tetrafluoretileno (ETFE) para cromatografia por injeção sequencial (SIC) e extração em fase sólida (SPE), e em tubos Silcosteel® para colunas de fase reversa em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A quantificação foi realizada por calibração externa, com a exatidão avaliada por meio da estratégia de adição e recuperação. Os métodos apresentaram intervalo de trabalho de 5,0 a 60 µg mL-1 (SIC), 2,5 a 50 µg mL-1 (CLAE) e 1,0 a 7,5 µg mL-1 para o método SPE-CLAE. Os limites de detecção e quantificação foram de 0,13 e 0,43 µg L-1, respectivamente, obtidos após SPE. As recuperações variaram entre 98% e 105%. O segundo trabalho foi a determinação de lisozima em amostras de clara de ovo.A coluna de troca catiônica (WCX) foi preparada a partir de metacrilato de glicidila (GMA) e EDMA e funcionalizada com iminodiacetato (IDA). As colunas de fase reversa foram preparadas com butil metacrilato (BMA) e EDMA. Amostras de clara de ovo foram diluídas e injetadas primeiramente na coluna IDA@poly(GMA-co-EDMA) retendo a lisozima (pI 11,4). A eluição da lisozima foi realizada com 5% de acetonitrila em 0,1% de TFA, seguida de separação em fase reversa utilizando um gradiente de 5 a 50% de acetonitrila em 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA). Os limites de detecção e quantificação foram 0,07 e 0,23 mg mL-1, respectivamente. As concentrações de lisozima na clara de ovo variaram de 2,26 ± 0,06 a 4,41 ± 0,08 mg g-1. Experimentos de adição/recuperação em dois níveis de concentração (0,25 e 0,50 mg mL-1) resultaram em recuperações de 94 a 115. Por fim, um novo material híbrido baseado em siloxano oligomérico poliédrico (POSS-MA) foi sintetizado para concentrar a proteína β-lactoglobulina (β-LG) em amostras de alimentos na microextração em fase sólida acoplada inline a eletroforese capilar e detecção por espectrometria de massas (µSPE-CE-MS). Tempo de carregamento, solventes e tipos de eluição foram otimizados para o desenvolvimento do método µSPE-CE-MS.O intervalo de trabalho do método foi de 0,25 a 10 µg mL-1, com limite de detecção de 0,1 g mL-1 e um enriquecimento de 100 vezes em comparação aos métodos padrão de CE-MS. O método demonstrou boa reprodutibilidade (RSD = 2,75%) e foi aplicado com sucesso para quantificar (β-LG em pães e biscoitos isentos de leite. As taxas de recuperação foram entre 94% e 129%. O baixo custo, a simplicidade e reutilização das colunas, bem como o simples preparo e os parâmetros analíticos, como boa extração e separação, tornam as fases estacionárias monolíticas alternativas acessíveis para análises rotineiras de proteínas.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 10.04.2025
    • Acesso à fonteAcesso à fonteDOI

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    Status:
    Nenhuma versão em acesso aberto identificada
    How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      VITEK, Renan. Preparo de materiais monolíticos para extração em fase sólida e colunas de separação aplicadas a proteínas. 2025. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-18032026-124931/. Acesso em: 31 mar. 2026.

    • APA

      Vitek, R. (2025). Preparo de materiais monolíticos para extração em fase sólida e colunas de separação aplicadas a proteínas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-18032026-124931/

    • NLM

      Vitek R. Preparo de materiais monolíticos para extração em fase sólida e colunas de separação aplicadas a proteínas [Internet]. 2025 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-18032026-124931/

    • Vancouver

      Vitek R. Preparo de materiais monolíticos para extração em fase sólida e colunas de separação aplicadas a proteínas [Internet]. 2025 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-18032026-124931/

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