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Tese

Caracterização molecular de bacteriófagos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes (2025)

  • Authors:
  • Autor USP: SANTOS JUNIOR, ARIOSVALDO PEREIRA DOS - IQ
  • Unidade: IQ
  • DOI: 10.11606/T.46.2025.tde-28012026-162629
  • Subjects: BACTERIÓFAGOS; BACTÉRIAS AERÓBICAS GRAM-NEGATIVAS; RESISTÊNCIA MICROBIANA ÀS DROGAS; SEGURANÇA ALIMENTAR
  • Keywords: Bacterial resistance; Fago; Fagoterapia; Food Safety; Phage; Phage therapy; Resistência bacteriana; Segurança alimentar
  • Agências de fomento:
  • Language: Português
  • Abstract: Segurança alimentar Resumo Vírus que infectam bactérias são denominados bacteriófagos, ou simplesmente fagos. O ciclo lítico é caracterizado pela adsorção do vírus à superfície bacteriana, injeção do material genético na célula hospedeira, replicação do genoma do fago e produção de novas partículas virais que são liberadas no ambiente pela lise da bactéria. O uso extensivo e, muitas vezes, indiscriminado de antibióticos ao longo das últimas décadas resultou no surgimento de bactérias resistentes a múltiplos medicamentos (MDR - multidrug-resistant), o que representa uma grave ameaça à saúde pública global. Dentre os microrganismos mais preocupantes estão as bactérias Gram-negativas MDR, como Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp. e Escherichia coli. Esses são patógenos altamente versáteis, capazes de causar infecções tanto agudas quanto crônicas, especialmente em pacientes imunocomprometidos. O objetivo principal deste projeto foi o isolamento e a caracterização de fagos estritamente líticos contra cepas de bactérias Gram-negativas resistentes a antibióticos. Para isso, escolhemos um fago modelo para uma caracterização molecular aprofundada com aplicação em fagoterapia e fizemos também a avaliação de um coquetel para ser usado em segurança alimentar. Para aplicação em fagoterapia, optou-se por coletar amostras dentro do campus Butantã da Universidade de São Paulo. A partir das placas de lise obtidas, foi possível proceder à amplificação dos fagos isolados como os fagos AMSX, AMSX_1 e LAFX. Para segurança alimentar foi realizado um estágio de 12 meses na Texas A&M University, no Center for Phage Technology, onde foram isolados 13 fagos utilizando o protocolo de pescaria de fagos desenvolvido nestre trabalho e outros quatro fagos pelo método tradicional de enriquecimento, contra cepas de E. coli e Salmonella.Os fagos T7, T4 e Lambda foram utilizados como modelos para comparação de resultados com os novos fagos. O fago LAFX, escolhido como modelo deste estudo em fagoterapia, foi classificado como um miofago devido à sua cauda longa e contráctil, foi isolado de uma cepa clínica de Pseudomonas aeruginosa, denominada PASM, obtida de um paciente no Hospital Universitário em São Luís do Maranhão. O genoma do fago LAFX foi sequenciado e analisado, confirmando sua classificação como um membro da ordem Caudoviricetes e do gênero Pakpunavirus. A partir da análise bioinformática, a ORF12 foi identificada como uma proteína de fibra da cauda, contendo um domínio RBP-like, semelhante à piocina tipo R de P. aeruginosa. Estudos de infecção mostraram que após 10 minutos os fagos estavam adsorvidos às células hospedeiras e o período de latência foi estimado em 26 minutos. Aos 30 minutos, foi observado um burst size de aproximadamente 80 partículas virais por célula infectada. O fago LAFX se mostrou estável em diferentes condições de temperatura e pH, sendo restrito a infecção apenas contra as cepas clínicas MDR de Pseudomonas aeruginosa analisadas. Ensaios de fagoterapia em modelo de Galleria mellonella mostraram que o LAFX foi capaz de impedir a morte de larvas infectadas com a cepa PASM. A análise inicial por criomicroscopia eletrônica (cryo-EM) permitiu determinar a estrutura do capsídeo com 4 Å de resolução, mostrando a organização das suas proteínas componentes.Os achados deste estudo posicionam o fago LAFX como um modelo para aplicação em fagoterapia. A análise genômica dos fagos isolados para o coquetel em segurança alimentar demonstrou a existência de linhagens já descritas, como o gênero Carltongylesvirus, bem como a descoberta de novos tipos que possivelmente representam novas famílias de fagos. Concluímos que um coquetel de fagos ativos em baixas temperaturas apresentam um potencial para aplicações em condições ambientais específicas, como segurança alimentar. O estudo de fagos em condições não convencionais (abaixo de 25ºC) continua sendo uma fonte valiosa de descobertas científicas e aplicações práticas.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.08.2025
    • Acesso à fonteAcesso à fonteDOI
    Informações sobre o DOI: 10.11606/T.46.2025.tde-28012026-162629 (Fonte: oaDOI API)
    • Este periódico é de acesso aberto
    • Este artigo NÃO é de acesso aberto
    How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      SANTOS JUNIOR, Ariosvaldo Pereira dos. Caracterização molecular de bacteriófagos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes. 2025. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28012026-162629/. Acesso em: 11 fev. 2026.

    • APA

      Santos Junior, A. P. dos. (2025). Caracterização molecular de bacteriófagos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28012026-162629/

    • NLM

      Santos Junior AP dos. Caracterização molecular de bacteriófagos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes [Internet]. 2025 ;[citado 2026 fev. 11 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28012026-162629/

    • Vancouver

      Santos Junior AP dos. Caracterização molecular de bacteriófagos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes [Internet]. 2025 ;[citado 2026 fev. 11 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28012026-162629/

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