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Tese

Development of chimeric antigen receptors for redirecting T and NK cells to control invasive candidiasis (2025)

  • Authors:
  • Autor USP: CAMPOS, GABRIELA YAMAZAKI DE - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • DOI: 10.11606/T.17.2025.tde-04042025-100316
  • Subjects: CANDIDÍASE; CÉLULAS; ANTÍDOTOS
  • Keywords: Candidíase invasiva; Cell therapy; Célula NK; Célula T; Chimeric antigen receptor; Invasive candidiasis; NK cells; Receptor de antígeno quimérico; T cells; Terapia celular
  • Agências de fomento:
  • Language: Inglês
  • Abstract: A candidíase invasiva, causada principalmente por Candida albicans, é uma infecção grave com importantes implicações clínicas. A Organização Mundial da Saúde classificou as infecções por Candida como uma prioridade crítica para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, devido ao aumento da resistência aos antifúngicos. A parede celular de Candida é composta principalmente por mananas, quitina e β-1,3- e β-1,6-glucanas, que são padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs), sendo reconhecidos por receptores imunológicos do hospedeiro. As células natural killer (NK) desempenham um papel essencial nas respostas imunes iniciais, liberando grânulos citotóxicos e citocinas que promovem a diferenciação de células T helper (Th)1, Th17 e células T citotóxicas. No entanto, espécies de Candida podem escapar dessas respostas imunológicas com mudanças morfológicas entre as formas de levedura, pseudohifa e hifa, fator de virulência que torna o tratamento mais desafiador. Para superar essas limitações, receptores de antígeno quiméricos (CARs), receptores sintéticos desenvolvidos para redirecionar células contra alvos específicos, representam uma abordagem terapêutica promissora para infecções fúngicas invasivas. Este estudo objetivou bioengenheirar linhagens de células T e NK (Jurkat e NK-92) para expressar CARs específicos para Candida, redirecionando a espécies de Candida in vitro e in vivo. Foram desenvolvidos quatro CARs de segunda geração, cada um com fragmentos variáveis de cadeia única (scFvs) originados de anticorpos monoclonais distintos contra C. albicans: scFv3-CAR, scFv5-CAR, scFv12-CAR e scFvk3-1-CAR. Esses CARs foram subclonados em vetores lentivirais, e as partículas lentivirais foram produzidasem células HEK-293T por transfecção. As células Jurkat foram modificadas com cada CAR separadamente, e as populações GFP+ enriquecidas por fluorescence-activated cell sorting (FACS). O scFvk3-1-CAR demonstrou a ativação mais robusta, mediando altos níveis de IL-2 contra formas de levedura e hifa de C. albicans e outras espécies como C. tropicalis, C. glabrata e isolados clínicos de C. auris. Em contraste, scFv3-CAR e scFv12-CAR não mostraram ativação significativa, enquanto scFv5-CAR mediou apenas uma ativação modesta. Logo, scFvk3-1-CAR foi selecionado para investigações adicionais. Foram avaliados mecanismos de ativação nas células Jurkat, incluindo a via de sinalização do CAR e a expressão de marcadores de exaustão e ativação, detectados por citometria de fluxo. As células NK-92 foram modificadas com scFvk3-1-CAR para avaliar seu potencial antifúngico. As células scFvk3-1-CAR-NK-92 exibiram aumento na produção de IFN-γ e expressão de CD107a, resultando em danos significativos a C. albicans in vitro. Em um modelo pré-clínico de candidíase invasiva, camundongos NOD scid gamma (NSG) infectados com C. albicans e tratados com scFvk3-1-CARNK-92 mostraram redução na carga fúngica nos rins, comparado aos animais não tratados. Finalmente, scFv k3-1 foi expresso como proteína individual em um sistema bacteriano, purificado e analisado usando uma microarranjo de glicanos. A análise confirmou que scFv k3-1 se liga especificamente à manana de C. albicans e não a outros 672 glicanos testados, destacando sua alta especificidade. Este estudo apresentou prova de conceito de um CAR que reconhece efetivamente espécies de Candida e aprimora a atividade antifúngica das células NK, representando uma abordagem promissora para futuras terapias de candidíase invasiva
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 17.01.2025
    • Acesso à fonteAcesso à fonteDOI
    Informações sobre o DOI: 10.11606/T.17.2025.tde-04042025-100316 (Fonte: oaDOI API)
    • Este periódico é de acesso aberto
    • Este artigo é de acesso aberto
    • URL de acesso aberto
    • Cor do Acesso Aberto: gold
    • Licença: cc-by-nc-sa
    How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      CAMPOS, Gabriela Yamazaki de. Development of chimeric antigen receptors for redirecting T and NK cells to control invasive candidiasis. 2025. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2025. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04042025-100316/. Acesso em: 28 dez. 2025.

    • APA

      Campos, G. Y. de. (2025). Development of chimeric antigen receptors for redirecting T and NK cells to control invasive candidiasis (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04042025-100316/

    • NLM

      Campos GY de. Development of chimeric antigen receptors for redirecting T and NK cells to control invasive candidiasis [Internet]. 2025 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04042025-100316/

    • Vancouver

      Campos GY de. Development of chimeric antigen receptors for redirecting T and NK cells to control invasive candidiasis [Internet]. 2025 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04042025-100316/

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