Produção de antígenos recombinantes para desenvolvimento de diagnóstico de leucose enzoótica bovina e neosporose (2024)
- Authors:
- Autor USP: FERREIRA, LUCIANE XAVIER - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- DOI: 10.11606/D.60.2024.tde-29042025-133925
- Subjects: NEOSPORA CANINUM; ANTÍGENOS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; LEUCEMIA; BOVINOS
- Keywords: Neospora caninum; Antígenos; Antigens; Bovine leukemia virus; Diagnose; Diagnóstico; Proteínas recombinantes; Recombinant protein; Vírus da leucemia bovina
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Neosporose e leucose enzoótica bovina (LEB) são doenças de alta soroprevalência em rebanho bovino que ocasionam perdas bilionárias para a cadeia produtiva. A neosporose é causada pela infecção do protozoário Neospora caninum e a LEB é desenvolvida em bovinos infectados com o vírus da leucemia bovina (VLB). Tanto para neosporose quanto para LEB não existem vacinas e tratamentos medicamentosos economicamente viáveis para animais de produção, sendo utilizado como medidas de controle o diagnóstico e manejo dos animais. Contudo, a depender da região, a acessibilidade ao diagnóstico é baixa para ambas as doenças, assim, perpetuando a transmissão e infecção do parasita e vírus. Em vista disso, o presente projeto tem como objetivo produzir antígenos recombinantes solúveis em tampões salinos para compor, no futuro, kits de diagnósticos, como os imunocromatográficos, visando aumentar a disponibilidade de diagnósticos para neosporose e LEB no Brasil. Os antígenos alvos foram: NcSAG1 e NcSRS2 para neosporose e VLBp24 para LEB. Em análise in sílico com ferramentas de bioinformática foi possível predizer estruturas, domínios, propriedades químicas e epítopos das proteínas. Regiões selecionadas dos genes dos antígenos foram clonados em pGEM-t-easy e pET28a(+), transformados em Escherichia coli (TOP10 e BL21) e expressos em E. coli BL21(DE3) por IPTG e autoindução. A purificação das proteínas ocorreu por coluna de níquel, e anticorpospoliclonais de cada proteína foram produzidos em camundongos BALB/c. O potencial antigênico dos antígenos foi avaliado por ELISA, onde foi possível determinar a máxima diluição dos soros policlonais frente aos seus antígenos, tendo sido 1:128.000, 1:16.000 e 1:2.000 para VLBp24, NcSAG1 e NcSRS2 respectivamente. O reconhecimento dos anticorpos contra seus respectivos antígenos recombinantes foi confirmado por Western blot. Os anticorpos anti-NcSAG1 reconheceram extratos de taquizoítas de N. caninum por ELISA (p < 0,05) e por Western blot. Ademais, foi observado o reconhecimento de dímeros de NcSAG1 em Western blot do antígeno purificado e extrato de taquizoíta. Por fim, avaliou-se o potencial dos anticorpos anti-NcSAG1 e anti-NcSRS2 na inibição da invasão do parasita, sendo que apenas com a combinação dos anticorpos foi possível uma inibição significativa (p < 0,05). Desta forma, as proteínas do presente trabalho foram produzidas de forma solúvel em tampão salino e confirmado seus potenciais antigênicos, assim, oportunizando a composição futura de ensaios imunocromatográficos com estes antígenos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2024
- Data da defesa: 04.09.2024
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo NÃO é de acesso aberto
-
ABNT
FERREIRA, Luciane Xavier. Produção de antígenos recombinantes para desenvolvimento de diagnóstico de leucose enzoótica bovina e neosporose. 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-29042025-133925/. Acesso em: 24 jan. 2026. -
APA
Ferreira, L. X. (2024). Produção de antígenos recombinantes para desenvolvimento de diagnóstico de leucose enzoótica bovina e neosporose (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-29042025-133925/ -
NLM
Ferreira LX. Produção de antígenos recombinantes para desenvolvimento de diagnóstico de leucose enzoótica bovina e neosporose [Internet]. 2024 ;[citado 2026 jan. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-29042025-133925/ -
Vancouver
Ferreira LX. Produção de antígenos recombinantes para desenvolvimento de diagnóstico de leucose enzoótica bovina e neosporose [Internet]. 2024 ;[citado 2026 jan. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-29042025-133925/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.60.2024.tde-29042025-133925 (Fonte: oaDOI API)
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