Efeito de recombinantes da enzima superóxido dismutase na proteção de células epidérmicas humanas contra o estresse oxidativo (2022)
- Authors:
- Autor USP: REIGADO, GUSTAVO RONCOLI - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- Subjects: BIOTECNOLOGIA; ANTIOXIDANTES; SUPERÓXIDO DISMUTASE; ESTRESSE OXIDATIVO; PELE; PEPTÍDEOS; FIBROBLASTOS
- Keywords: Antioxidantes; Antioxidants; cell penetration peptides; estresse oxidativo; oxidative stress; pele; peptídeos de penetração celular; skin; superoxide dismutase; superóxido dismutase
- Language: Português
- Abstract: A pele, principal barreira de defesa do organismo, durante o ciclo vital, neutraliza espécies reativas de oxigênio (ERO) e radicais livres por meio de sistemas antioxidantes enzimáticos e não enzimáticos. A superóxido dismutase (SOD) é um dos principais componentes do sistema de defesa antioxidante enzimático celular, fundamental no mecanismo de defesa contra o estresse oxidativo, sendo a responsável pela dismutação do radical superóxido em oxigênio molecular e peróxido de hidrogênio. A superóxido dismutase de Trichoderma reesei (TrSOD) é uma enzima bem caracterizada, sendo estável entre 30 e 90ºC por 1 h com atividade em pH entre 2,6 e 9,0. Este trabalho teve como objetivo clonar, expressar, purificar e avaliar o efeito antioxidante protetor dessa enzima nas células da pele quando fundida aos peptídeos TAT e Abalone (Ab) para permitir a penetração celular. TrSOD, TAT-TrSOD-Yfp (fundida com a proteína fluorescente amarela) e Ab-TrSOD foram expressos em E. coli e purificados como proteínas solúveis. A citotoxicidade das enzimas, nas concentrações de 1, 3 e 6 µM, foi avaliada nos períodos de 24 e 48 h de incubação, não sendo observados efeito citotóxico sobre os fibroblastos 3T3 e queratinócitos HaCaT. A enzima Ab-TrSOD foi detectada no interior celular, em quantidade até 100% maior em relação a enzima não fundida ao peptídeo; TAT-TrSOD-Yfp não foi detectada no interior das células.As células 3T3 e HaCaT foram expostas ao agente oxidante hidroperóxido de terc-butilo (tBH) e avaliadas quanto à geração de ERO, na presença ou não das enzimas recombinantes. Em fibroblastos 3T3, TAT-TrSOD-Yfp foi capaz de diminuir a geração de ERO em 9, 16 e 18% quando usada por 2 horas nas concentrações de 1, 3 e 6 µM, respectivamente. Nessa mesma linhagem celular, Ab-TrSOD promoveu diminuição de cerca de 25% na formação de ERO nas concentrações de 1, 3 e 6 µM quando usada por 2 horas. Quando comparada à TrSOD, promoveu diminuição na formação de ERO de 17% e 12% nas concentrações de 1 e 6 µM, respectivamente, por 2 horas, indicando que essa forma recombinante se mostrou mais eficaz na redução do estresse oxidativo em relação à TrSOD. Em queratinócitos HaCaT, apenas TAT-TrSOD-Yfp reduziu em 5% a geração em ERO em relação a TrSOD. Esses resultados indicam que a fusão da SOD com esses PPC aumentou a capacidade antioxidante dos fibroblastos. Além disso, Ab foi capaz de aumentar a penetração celular da enzima e nenhuma das enzimas recombinantes foi tóxica para as células, abrindo perspectivas para o desenvolvimento de produtos para proteção antioxidante da pele que possam ter aplicação terapêutica e cosmética.
- Imprenta:
- Data da defesa: 27.01.2022
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ABNT
REIGADO, Gustavo Roncoli. Efeito de recombinantes da enzima superóxido dismutase na proteção de células epidérmicas humanas contra o estresse oxidativo. 2022. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10052024-133553/. Acesso em: 01 dez. 2025. -
APA
Reigado, G. R. (2022). Efeito de recombinantes da enzima superóxido dismutase na proteção de células epidérmicas humanas contra o estresse oxidativo (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10052024-133553/ -
NLM
Reigado GR. Efeito de recombinantes da enzima superóxido dismutase na proteção de células epidérmicas humanas contra o estresse oxidativo [Internet]. 2022 ;[citado 2025 dez. 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10052024-133553/ -
Vancouver
Reigado GR. Efeito de recombinantes da enzima superóxido dismutase na proteção de células epidérmicas humanas contra o estresse oxidativo [Internet]. 2022 ;[citado 2025 dez. 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10052024-133553/ - Vitamins Modulate the Expression of Antioxidant Genes in Progesterone-Treated Pancreatic β Cells: Perspectives for Gestational Diabetes Management
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