Investigação do perfil de células T CD4+ e T CD8+ utilizando a citometria de fluxo na busca de múltiplos biomarcadores na tuberculose latente (2025)
- Authors:
- Autor USP: FERREIRA, BÁRBARA SUÉLLEN GUIMARÃES MARIN - FM
- Unidade: FM
- DOI: 10.11606/D.5.2025.tde-30092025-141118
- Subjects: BIOMARCADORES; CITOMETRIA DE FLUXO; TUBERCULOSE
- Keywords: Biomarkers; Flow Cytometry; Interferon gamma release tests; Latente tuberculosis; Teste de liberação de IFN-gama; Tuberculose latente; Tuberculosis
- Language: Português
- Abstract: Introdução: A tuberculose (TB) é a principal causa de morte por doença infecciosa no mundo, em 2023 levou a óbito mais de 1,25 milhões de pessoas. Para acabar com a pandemia da TB é essencial além de diagnosticar e tratar os casos de TB, identificar e tratar os hospedeiros de Mycobacterium tuberculosis (Mtb), que são os indivíduos com infecção latente da tuberculose (ILTB). A infecção latente da tuberculose (ILTB) é caracterizada pela resposta imune persistente ao Mtb sem manifestação clínica, sendo que um quarto da população mundial está infectada. Destes, 510% podem evoluir para a forma ativa, especialmente em indivíduos imunossuprimidos e crianças. A ILTB é diagnosticada pela prova tuberculínica (PT) ou pelo teste de liberação de interferon-gama (IGRA), incluindo o QuantiFERON-TB Gold Plus (QTF-Plus), estes devem ter resultado reagente, a ILTB é confirmada após exclusão da TB ativa. Os ensaios imunológicos detectam a resposta imune celular a antígenos de Mtb, mas não diferenciam ILTB da doença ativa (TBa). Recentemente o SUS incorporou o IGRA (QTF-Plus) para populações com maior risco de progressão para TB. O QTF-Plus consiste de quatro tubos: um sem estímulo (nil), um com estímulo para células T CD4+ (tb1), outro com estímulos para células T CD4+ e T CD8+ (TB2) e o tubo controle contendo mitógeno (Mit). Sugerimos que a caracterização de múltiplos biomarcadores nas subpopulações de células T CD4+ e T CD8+ com painel de imunofenotipagem e ensaio deestimulação universais, pode definir assinaturas imunes que melhor identifiquem a TB latente. Objetivo: Identificar biomarcadores em células T CD4+ e T CD8+ (naive, efetora, memória central e memória efetora) do sangue periférico remanescentes do teste QTF-Plus utilizando painel de imunofenotipagem universal de células T modificado na tentativa de diferenciar a ILTB da TB ativa apenas com o mesmo exame laboratorial modificado (dosagem de IFN-g e imunofenotipagem). Material e métodos: Avaliamos 91 amostras remanescentes do QTF-Plus (tubos: nil, TB1, TB2, Mitógeno) de: indivíduos saudáveis com QTF-Plus não reagente (Grupo 1 G1), indivíduos investigados quanto a ILTB com QTF-Plus reagente (G2), pacientes com TB ativa com QTF-Plus reagente (G3), indivíduos investigados quanto a ILTB com QTF-Plus não reagente (G4) e indivíduos com TB ativa com QTF-Plus não reagente. O IFN- foi dosado no plasma coletado dos quatro tubos do QTF-Plus por ELISA conforme instruções do fabricante. As amostras remanescentes dos quatro tubos do QTF-Plus de cada paciente foram marcadas com painel de imunofenotipagem universal modificado de 12 cores e analisadas em citômetro de fluxo. As populações de células T CD4+ e T CD8+ foram definidas conforme expressão de CCR7 e CD45RA (naive, memória central, efetora e memória efetora), ativação (CD27, CD38, CD69, HLA-DR) e exaustão (PD-1, KLRG-1). Os dados foram analisados com estratégias convencionais de estabelecimento hierárquico de gates ede redução de dimensão (UMAP). Resultados: Apenas os grupos G2 (ILTB) e G3 (TB ativa) produziram IFN- (> 0,35 UI/mL) aos antígenos de TB1 e TB2, como esperado. As células de todos os indivíduos dos cinco grupos produziram IFN- ao mitógeno. Houve variação no percentual de células T, T CD4+ e T CD8+ de G2, G3 e G4 em relação a G1, considerando que G2 a G5 foram compostos por pacientes com doenças autoimunes (G2 e G4) e com TB ativa (G3 e G4), esta variação era esperada. Nos grupos G2 e G3 houve presença de células T CD4+ e T CD8+ específicas detectadas pela expressão de CD69 e HLA-DR nos tubos TB1 e TB2, porém não foi diferente da condição sem estímulo (nil). A expressão de CD69 em células T CD8+ totais et CD8+ naive no tubo Nil diferenciou G3 de G2.O mitógeno aumentou a frequência de células T CD4+ e T CD8+ expressando CD69, HLADR, KLRG-1 e CD279 (PD-1). A frequência de células T CD4+ efetoras (Ef), naive (Na), memória efetora (ME) foi similar entre os indivíduos dos cinco grupos, o mitógeno exerce efeito distinto em cada uma delas, por exemplo, aumenta a frequência das naive e diminui as de ME, além disso, as de MC estão diminuídas em todos os tubos de G5 em relação a G2 e G4, a frequência das de MC entre G1a G4 foi semelhante. A frequência de células T CD8+ Ef, Na e MC foram similares entre os grupos, com exceção de MC que foi diminuída em G5 em relação a G2, a frequência de memória efetora em células T CD8+ foi maior em G1 comparado a G2, G3, G4 e G5. Afrequência de células T CD4+ e T CD8+ classificadas conforme fenótipo de Ef/Na/MC/ME expressando CD69+, HLA-DR, CD38, CD27, CD279, KLRG-1 foi similar entre os grupos ILTB (G2) e TBa (G3) que responderam no QTF-PLUS. Conclusão: O uso do painel de imunofenotipagem universal modificado do Projeto de Imunologia Humano foi capaz de diferenciar a ILTB da TB ativa utilizando como ensaio de estimulação universal o QTF-Plus
- Imprenta:
- Data da defesa: 09.06.2025
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
- URL de acesso aberto
- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
FERREIRA, Bárbara Suéllen Guimarães Marin. Investigação do perfil de células T CD4+ e T CD8+ utilizando a citometria de fluxo na busca de múltiplos biomarcadores na tuberculose latente. 2025. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-30092025-141118/. Acesso em: 12 jan. 2026. -
APA
Ferreira, B. S. G. M. (2025). Investigação do perfil de células T CD4+ e T CD8+ utilizando a citometria de fluxo na busca de múltiplos biomarcadores na tuberculose latente (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-30092025-141118/ -
NLM
Ferreira BSGM. Investigação do perfil de células T CD4+ e T CD8+ utilizando a citometria de fluxo na busca de múltiplos biomarcadores na tuberculose latente [Internet]. 2025 ;[citado 2026 jan. 12 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-30092025-141118/ -
Vancouver
Ferreira BSGM. Investigação do perfil de células T CD4+ e T CD8+ utilizando a citometria de fluxo na busca de múltiplos biomarcadores na tuberculose latente [Internet]. 2025 ;[citado 2026 jan. 12 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-30092025-141118/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.5.2025.tde-30092025-141118 (Fonte: oaDOI API)
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
