A Poly(RC)-Binding Protein 2 (PCBP2) como possível ligante celular do Ferro Lábil (LIP) (2024)
- Authors:
- Autor USP: FIGUEIRA, RAPHAEL - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- DOI: 10.11606/D.59.2024.tde-20122024-113626
- Subjects: FERRO; ESTRESSE OXIDATIVO; PROTEÍNAS
- Keywords: Glutathione; Glutationa; Labile iron pool; Labile iron pool; LIP; PCBP2
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Ferro Lábil (Labile Iron Pool, LIP) é uma fonte dinâmica e universal de ferro, essencial para o fornecimento rápido e eficiente de ferro às proteínas nascentes. Está associado a doenças relacionadas ao excesso de ferro e estresse oxidativo, embora sua identidade ainda seja desconhecida. Estudos recentes têm sugerido que as proteínas da família poly(rC) binding (PCBP1 e PCBP2) podem atuar como carregadores e transportadores de LIP citosólico. Este estudo foi dividido em duas etapas distintas. Na primeira etapa, o gene da proteína PCBP2 foi clonado no vetor pET28a usando o método de CPEC (Circular Polymerase Extension Cloning) e transformado em células E. coli RosettaTM (DE3) pLysS para expressão e purificação da proteína. Ensaios experimentais foram realizados em amplas faixas de pH e temperatura para verificar a integridade estrutural da proteína recombinante, sua caracterização, remoção da cauda Histag e redução dos resíduos de cisteína. Na segunda etapa, realizamos ensaios de fluorescência para estudar a competitividade de CA por Fe(II) na presença e ausência de GSH e PCBP2. Utilizamos um modelo computacional para correlacionar as espécies em equilíbrio de CA, LIPT, CALIP e CA (Kd) na determinaçãoda constante de dissociação (Kd), obtendo valores consistentes com os encontrados na literatura. A primeira constante termodinâmica de afinidade (Kd) entre Fe-PCBP2 foi determinada usando o mesmo método computacional, revelando um Kd = 2,7 ± 0,3 µM para Fe-PCBP2. Estes resultados indicam uma possível ligação relativamente fraca entre a proteína PCBP2 por Fe(II). Em condições biológicas, onde as concentrações de GSH no meio citosólico são elevadas em comparação com PCBP2, os valores de Kd sugerem que a proteína pode não competir eficazmente para carregar ferro, implicando na possível não interação entre essas espécies e indicando que boa parte do Fe(II) celular possivelmente estaria ligado à glutationa. Essas descobertas fornecem novos insights sobre o papel potencial de PCBP2 na homeostase do ferro e destacam a complexidade envolvida na regulação do Ferro Lábil e sua interação com outras moléculas biológicas chave
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2024
- Data da defesa: 31.10.2024
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
- URL de acesso aberto
- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
FIGUEIRA, Raphael e TOLEDO JUNIOR, José Carlos. A Poly(RC)-Binding Protein 2 (PCBP2) como possível ligante celular do Ferro Lábil (LIP). 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-20122024-113626/. Acesso em: 11 out. 2025. -
APA
Figueira, R., & Toledo Junior, J. C. (2024). A Poly(RC)-Binding Protein 2 (PCBP2) como possível ligante celular do Ferro Lábil (LIP) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-20122024-113626/ -
NLM
Figueira R, Toledo Junior JC. A Poly(RC)-Binding Protein 2 (PCBP2) como possível ligante celular do Ferro Lábil (LIP) [Internet]. 2024 ;[citado 2025 out. 11 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-20122024-113626/ -
Vancouver
Figueira R, Toledo Junior JC. A Poly(RC)-Binding Protein 2 (PCBP2) como possível ligante celular do Ferro Lábil (LIP) [Internet]. 2024 ;[citado 2025 out. 11 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-20122024-113626/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.59.2024.tde-20122024-113626 (Fonte: oaDOI API)
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