Função da ADP-ribosilação em resposta à inibição do lisossomo (2025)
- Authors:
- Autor USP: DURÉ, DULCE MARÍA GONZÁLEZ - IQ
- Unidade: IQ
- DOI: 10.11606/D.46.2025.tde-13062025-113317
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; MITOCÔNDRIAS; CULTURA DE CÉLULAS; IMUNOFLUORESCÊNCIA
- Keywords: ADP-ribosilação; ADP-ribosylation; Autofagia; Autophagy; Chloroquine; Cloroquina; Mitochondria; Mitocôndria; PARP3; PARP3
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A ADP-ribosilação é uma modificação pós-traducional caracterizada pela transferência de uma ou mais unidades de ADP-ribose, a partir de NAD+, para resíduos específicos de aminoácidos em proteínas-alvo. Essa reação é catalisada por enzimas da família das ADP-ribosiltransferases, em particular um subgrupo destas denominado PARPs. Até o momento, foram identificadas 17 PARPs envolvidas em diversos processos celulares, como reparo de DNA, sinalização celular, biossíntese proteica, morte celular e resposta antiviral. Algumas PARPs têm sido implicadas na via de autofagia, por ADP-ribosilar ou interagir com componentes essenciais dessa via. Contudo, o papel molecular exato da ADP-ribosilação de proteínas durante a autofagia permanece pouco elucidado. Nosso grupo observou que a cloroquina (CQ), um agente lisossomotrópico que bloqueia a autofagia ao neutralizar o pH lisossomal, promove um aumento significativo nos níveis de ADP-ribosilação no citoplasma de células humanas tratadas. Dessa forma, este estudo investigou o papel da ADP-ribosilação em resposta à inibição lisossomal induzida por agentes lisossomotrópicos. Utilizando abordagens como mini-screen de siRNAs direcionados às PARPs, células knockout e inibidores específicos, identificamos que essa ADP-ribosilação é mediada por PARP3. Ensaios de imunofluorescência revelaram que o sinal de ADP-ribose, de maneira geral, não co-localiza com autofagossomos ou autolisossomos, mas co-localiza amplamente com a rede mitocondrial.Além disso, uma análise cinética demonstrou que a ADP-ribosilação induzida pela CQ ocorre a partir de 2 horas de tratamento e permanece constante até 24 horas, enquanto os níveis de LC3 II e p62 aumentam gradativamente ao longo do tempo, sugerindo que a ADP-ribosilação detectada aqui não marca substratos de degradação por autofagia. Embora um dos objetivos iniciais fosse identificar as proteínas-alvo dessa ADP-ribosilação, verificou-se que o reagente α-ADP-ribose (HCA354) utilizado na maioria dos ensaios de imunofluorescência também detecta NADH crosslinkado a proteínas devido ao crosslinking promovido pelo paraformaldeío (PFA) 4% durante a fixação. Assim, parte deste estudo focou na caracterização da especificidade de diferentes reagentes α-ADP-ribose. Comparações entre fixações com PFA 4% e Metanol:acetona (MeOH:Ac) e a utilização de 5 reagentes α-ADP-ribose diferentes, que detectam ou não NADH crosslinkado, demonstraram que o sinal de ADP-ribose varia conforme o método de fixação e os reagentes utilizados. No entanto, os resultados obtidos com ambos os métodos de fixação demonstraram que o sinal de ADP-ribose observado após o tratamento com CQ de fato reflete ADP-ribosilação modulada principalmente por PARP3 e que CQ não altera a razão NAD+/NADH mitocondrial. Em conjunto, este estudo sugere uma nova função de PARP3 em resposta à inibição da autofagia, na qual proteínas mitocondriais são potenciais alvos dessa ADP-ribosilação, possivelmente como consequênciada disfunção mitocondrial.
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- Data da defesa: 18.02.2025
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
DURÉ, Dulce Maria Gonzalez. Função da ADP-ribosilação em resposta à inibição do lisossomo. 2025. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2025. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13062025-113317/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Duré, D. M. G. (2025). Função da ADP-ribosilação em resposta à inibição do lisossomo (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13062025-113317/ -
NLM
Duré DMG. Função da ADP-ribosilação em resposta à inibição do lisossomo [Internet]. 2025 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13062025-113317/ -
Vancouver
Duré DMG. Função da ADP-ribosilação em resposta à inibição do lisossomo [Internet]. 2025 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13062025-113317/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.46.2025.tde-13062025-113317 (Fonte: oaDOI API)
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