Expressão heteróloga em Pichia pastoris da Ts7, uma α-KTx da peçonha de Tityus serrulatus, e avaliação da sua atividade imunossupressora (2024)
- Authors:
- Autor USP: JACOB, BEATRIZ DE CÁSSIA DA SILVA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 601
- DOI: 10.11606/D.60.2024.tde-03122024-173826
- Subjects: ANIMAIS PEÇONHENTOS; TOXINAS EM ANIMAL; ESCORPIÕES; CÉLULAS-TRONCO
- Keywords: Atividade imunossupressora; Expressão heteróloga; Heterologous expression; Immunosuppressive activity; Neurotoxinas; Neurotoxins; Tityus serrulatus; Ts7
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Acidentes com animais peçonhentos são cada vez mais recorrentes no Brasil, podendo ser causados por diferentes espécies de animais. Os escorpiões se destacam, pois o número de acidentes ocasionados por eles cresce anualmente, principalmente devido sua fácil adaptação ao ambiente urbano e ao crescimento descontrolado de grandes centros. A espécie Tityus serrulatus é responsável pelos casos de maior gravidade e sua peçonha é composta por neurotoxinas, proteases, hipotensinas, hialuronidases, carboidratos, mucopolissacarídeos, aminoácidos, aminas, sais inorgânicos, entre outros. As neurotoxinas presentes na peçonha podem atuar em canais para sódio (NaTxs) ou para potássio (KTxs) dependentes de voltagem. A Ts7 é uma α-KTx capaz de interagir com os canais para potássio do tipo Kv1.1, Kv1.2, Kv1.3, Kv1.6, e Shaker IR, sendo o canal Kv1.3 um potencial alvo terapêutico no tratamento de doenças autoimunes, pois o bloqueio desses canais nas células T de memória efetora suprimem a proliferação celular. Devido ao baixo rendimento da Ts7 nativa é necessário optar por meios alternativos para realizar sua bioprospecção. A expressão heteróloga em Pichia pastoris se mostra uma boa opção pela capacidade do organismo de liberar o produto recombinante para o meio e realizar modificações pós-traducionais. No presente estudo foi realizada a expressão heteróloga da rTs7 na levedura metilotrófica P. pastoris. A purificação foi realizada através da cromatografia de afinidade (IMAC) e cromatografia líquida rápida de proteínas (Fast Protein Liquid Chromatography, FPLC) em coluna de fase reversa C-18. A partir desses ensaiosfoi possível obter a toxina recombinante e a proteína foi adequadamente purificada e o seguimento de poli-His foi clivado. Também foi realizada a purificação da toxina nativa presente na fração XII-A da peçonha do escorpião T. serrulatus, indispensável para os testes comparativos propostos para demonstrar se a atividade da toxina recombinante e nativa são semelhantes. A purificação também foi feita por FPLC, em coluna de fase reversa C18. As atividades das proteínas nativa e recombinante (1 e 2 µM, respectivamente) foram avaliadas através de ensaios de eletrofisiologia em canais para potássio dependentes de voltagem expressos em oócitos de Xenopus laevis. As toxinas foram capazes de bloquear canais Kv1.1, Kv1.2 e Kv1.3. Também foram realizados ensaios de imunossupressão in vitro (diferenciação de linfócitos T CD4+ naïve) na presença das toxinas nativa e recombinante (1, 2, 4 e 8 µM). A diferenciação foi avaliada pela frequência de células IL17+ por citometria de fluxo. Ambas as toxinas inibiram a diferenciação dos linfócitos, sugerindo ação imunossupressora. Estudos adicionais serão necessários para confirmar esta ação, mas os resultados obtidos são muito promissores, indicando seu potencial uso para o desenvolvimento de fármacos imunossupressores
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2024
- Data da defesa: 27.02.2024
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
JACOB, Beatriz de Cássia da Silva. Expressão heteróloga em Pichia pastoris da Ts7, uma α-KTx da peçonha de Tityus serrulatus, e avaliação da sua atividade imunossupressora. 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-03122024-173826/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Jacob, B. de C. da S. (2024). Expressão heteróloga em Pichia pastoris da Ts7, uma α-KTx da peçonha de Tityus serrulatus, e avaliação da sua atividade imunossupressora (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-03122024-173826/ -
NLM
Jacob B de C da S. Expressão heteróloga em Pichia pastoris da Ts7, uma α-KTx da peçonha de Tityus serrulatus, e avaliação da sua atividade imunossupressora [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-03122024-173826/ -
Vancouver
Jacob B de C da S. Expressão heteróloga em Pichia pastoris da Ts7, uma α-KTx da peçonha de Tityus serrulatus, e avaliação da sua atividade imunossupressora [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-03122024-173826/ - Anti-vaccination movements in the world and in Brazil
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Informações sobre o DOI: 10.11606/D.60.2024.tde-03122024-173826 (Fonte: oaDOI API)
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