Inibicao in vitro da RNA Polimerase de Influenza A por compostos sintéticos inovadores desenvolvidos via docking molecular a partir de uma quimioteca brasileira (2024)
- Authors:
- Autor USP: DARIDO, MARIA LAURA GOUSSAIN - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- DOI: 10.11606/D.42.2024.tde-30052025-101838
- Subjects: MICROBIOLOGIA; RNA POLIMERASES; INFLUENZA; ANTIVIRAIS; VACINAS VIRAIS; REPLICAÇÃO VIRAL; CITOTOXICIDADE IMUNOLÓGICA; TERAPÊUTICA
- Keywords: In vitro; Antiviral; Antiviral, In vitro; Influenza; Influenza; RNA Polimerase; RNA Polymerase
- Language: Português
- Abstract: O vírus Influenza A é uma das principais causas de infecções respiratórias e tem grande importância epidemiológica global. Apesar das vacinas anuais e antivirais disponíveis, a rápida mutação do vírus e o surgimento de cepas altamente patogênicas destacam a necessidade de novos fármacos antivirais. Nesse cenário, estudos in silico têm sido promissores no desenvolvimento de novas drogas, permitindo a otimização de estruturas moleculares e a redução de custos e tempo no processo de criação. Este estudo investigou a citotoxicidade em células MDCK II e a atividade antiviral de 11 compostos sintéticos (LMed 47, 87, 88, 92, 93, 96, 97, 98, 99, 100 e 101) contra o vírus Influenza A (H1N1). Os compostos foram selecionados por meio de docking molecular, visando interações com as subunidades PB1-PA e PB2 da RNA polimerase de H1N1, alvos críticos para a replicação viral. A triagem antiviral in vitro foi realizada utilizando os ensaios de MTT e Formação de Foco (FFU/mL) para determinação da concentração citotóxica (CC50) e inibitória (CI50) de 50%. Os compostos com melhores índices de seletividade (IS: CC50/CI50) tiveram seu mecanismo de ação avaliados em ensaios de tempo de adição (1, 3 e 6 horas pós-infecção); inibição da síntese proteica (western blot), análise da expressão de RNA mensageiro e RNA viral (RT-PCR), e ensaios de ação direta na RNA polimerase (reporte de gene e luciferase). Dos 11 compostos, LMed 97, 98, 99 e 101 apresentaram maior citotoxicidade, com valores de CC50 variando entre 40,5 e 50 μg/mL. Em contraste, os demais compostos demonstraram menor citotoxicidade, com CC50 superior a 100 μg/mL. No ensaio antiviral, LMed 88 e 47 nao demonstraram atividade inibitória significativa, com CI50 indefinido e de 70,71 μg/mL, respectivamente.Os demais compostos inibiram o IAV em baixas concentrações, com CI50 variando de 0,4225 a 6,376 μg/mL. Dentre esses, LMed 99 e 93 se destacaram, apresentando os melhores SI. Esses resultados foram corroborados pelos estudos in silico, os quais indicaram esses compostos como os de melhor interação com o alvo PB1-PA da RNA polimerase viral. Além disso, foi observada uma redução na expressão de proteínas virais (PB1, PA, PB2, NP e M1) nas células tratadas com LMed 93 e LMed 99, quando administrados 1 e 3 hpi. LMed 99 manteve essa redução até 6 hpi, sugerindo uma ação prolongada. Resultados semelhantes foram observados na diminuição da expressão de vRNA em todos os tempos de tratamento. Esses dados indicam que LMed 99 pode atuar diretamente na RNA polimerase viral, inibindo a replicação do vírus de forma eficiente. No entanto, o ensaio de luciferase mostrou um aumento inesperado da atividade da RNA polimerase para o composto LMed 93, sugerindo a necessidade de novos experimentos para elucidar completamente seu mecanismo de ação. Este estudo ressalta o potencial terapêutico de LMed 93 e, especialmente, de LMed 99 como alternativas promissoras e seguras para o tratamento da Influenza A H1N1, mostrando eficácia antiviral significativa e baixos níveis de citotoxicidade, reforçando sua viabilidade como novos agentes antivirais, especialmente em um cenário de crescente resistência aos tratamentos convencionais.
- Imprenta:
- Data da defesa: 11.10.2024
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
DARIDO, Maria Laura Goussain. Inibicao in vitro da RNA Polimerase de Influenza A por compostos sintéticos inovadores desenvolvidos via docking molecular a partir de uma quimioteca brasileira. 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-101838/. Acesso em: 01 jan. 2026. -
APA
Darido, M. L. G. (2024). Inibicao in vitro da RNA Polimerase de Influenza A por compostos sintéticos inovadores desenvolvidos via docking molecular a partir de uma quimioteca brasileira (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-101838/ -
NLM
Darido MLG. Inibicao in vitro da RNA Polimerase de Influenza A por compostos sintéticos inovadores desenvolvidos via docking molecular a partir de uma quimioteca brasileira [Internet]. 2024 ;[citado 2026 jan. 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-101838/ -
Vancouver
Darido MLG. Inibicao in vitro da RNA Polimerase de Influenza A por compostos sintéticos inovadores desenvolvidos via docking molecular a partir de uma quimioteca brasileira [Internet]. 2024 ;[citado 2026 jan. 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-101838/ - Anti-respiratory syncytial virus and anti-herpes simplex virus activity of chemically engineered sulfated fucans from Cystoseira indica
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Informações sobre o DOI: 10.11606/D.42.2024.tde-30052025-101838 (Fonte: oaDOI API)
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