Desenvolvimento de um sistema rápido para a detecção de infecções virais (2024)
- Authors:
- Autor USP: CIOFFI, VICTOR BOLSANELLI - ICB
- Unidade: ICB
- DOI: 10.11606/T.42.2024.tde-30052025-094717
- Subjects: MICROBIOLOGIA; COVID-19; PROTEÍNAS; PEPTÍDEOS; IMUNOLOGIA; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; ESCHERICHIA COLI; CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE; WESTERN BLOTTING
- Keywords: Immunology; Imunologia; Proteínas; Proteins; RAD-Display; RAD-Display; SARS-CoV-2; SARS-CoV-2
- Language: Português
- Abstract: No início de 2020, foi declarada a pandemia mundial do SARS-CoV-2, um novo betacoronavírus com alta taxa de transmissão e patogenicidade. Estruturalmente, o SARS-CoV-2 tem 4 proteínas estruturadas de relevância clínica, a proteína S (Spike), proteína N (nucleocapsídio), proteína M (membrana) e proteína E (envelope). A proteína S é uma das mais importantes para a busca de anticorpos neutralizantes, uma vez que é responsável pela interação com o receptor celular humano, a proteína ACE2 (da sigla em inglês: Angiotensin-Converting Enzyme 2) desencadeando a entrada do vírus na célula. Neste trabalho, propomos avaliar uma nova estratégia de apresentação de peptídeos utilizando o SARS-CoV-2, especificamente a proteína S, para estudos relacionados à imunogenicidade, respostas celulares e diagnósticos, a qual também servirá como uma extraordinária ferramenta para estudos de proteínas, em geral. A estratégia é baseada na exposição dos peptídeos em uma proteína âncora altamente estável, solúvel e que mantém a conformação estrutural. Ferramentas de bioinformática foram utilizadas para escolha dos peptídeos, análise da imunogenicidade e desenho dos clones.As proteínas foram produzidas em células de Escherichia coli BL21(DE3)/pUBS520 e purificadas em dois passos, por cromatografia de afinidade a metal imobilizado e cromatografia de exclusão molecular, respectivamente. As proteínas foram usadas em ensaios de ELISA, inoculadas em camundongos para produção de anticorpos e usadas em ensaios de western blotting, imunofluorescência e neutralização viral. Os resultados, apontam que a estratégia é eficiente para a exposição dos peptídeos e utilização das proteínas recombinantes para geração de anticorpos, tanto para o reconhecimento de proteínas virais quanto para identificação de importantes epítopos para geração de anticorpos neutralizantes da infecção viral em ensaios in vitro. O fenômeno foi intensificado quando conjugado a nanopartículas proteicas, denominadas como Qβ, um VLP oriundo de fagos. Os resultados apresentados aqui indicam que a plataforma tem grande potencial para apresentação e estudo de epítopos de diferentes proteínas.
- Imprenta:
- Data da defesa: 06.09.2024
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
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-
ABNT
CIOFFI, Victor Bolsanelli. Desenvolvimento de um sistema rápido para a detecção de infecções virais. 2024. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-094717/. Acesso em: 01 abr. 2026. -
APA
Cioffi, V. B. (2024). Desenvolvimento de um sistema rápido para a detecção de infecções virais (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-094717/ -
NLM
Cioffi VB. Desenvolvimento de um sistema rápido para a detecção de infecções virais [Internet]. 2024 ;[citado 2026 abr. 01 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-094717/ -
Vancouver
Cioffi VB. Desenvolvimento de um sistema rápido para a detecção de infecções virais [Internet]. 2024 ;[citado 2026 abr. 01 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-30052025-094717/
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