Fibrose corneana em coelhos e sua relação com o defeito de regeneração das barreiras epiteliais ao influxo de Fator Transformador de Crescimento beta (2024)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, RODRIGO CARLOS DE - FM
- Unidade: FM
- DOI: 10.11606/T.5.2024.tde-07042025-170208
- Subjects: CICATRIZAÇÃO; COELHOS
- Keywords: Barreira epitelial; Basement membrane regeneration; Ceratócitos; Colágeno tipo IV; Collagen type IV; Corneal fibrosis; Epithelial barrier; Fator Transformador de Crescimento beta; Fibrose corneana; Heparan sulfate proteoglycan 2; Keratocytes; Miofibroblastos; Myofibroblasts; Proteoglicano de heparan sulfato 2; Rabbits; Regeneração da membrana basal; Transforming Growth Factor beta; Wound healing
- Language: Português
- Abstract: OBJETIVOS: Investigar a expressão e localização de Fator Transformador de Crescimento (TGF) 1 e 2, a regeneração da membrana basal epitelial (MBE), e a correlação destes com o desenvolvimento da fibrose estromal em córneas de coelhos submetidos a reprodutível lesão epitélio-estromal por ceratectomia fotorrefrativa (PRK). MÉTODOS: Cento e vinte córneas de coelhos fêmeas foram incluídos no estudo e distrubuídos nos seguintes grupos: (1) nenhuma cirurgia; (2) apenas debridamento epitelial; (3) -4.5 dioptrias (D) PRK; e (4) -9D PRK. Os grupos tratados com -4.5 ou -9 D de PRK foram subdivididos em subgrupos de acordo com o intervalo de pós-operatório (0, 2, 6 e 12 horas, 1, 2, 4, 7 e 10 dias, 2, 3, 4, 6 e 8 semanas). Quatro coelhos foram incluídos em cada grupo ou subgrupo. A presença de fibrose corneana foi pesquisada por fotografias da biomicroscopia da córnea e por imuno-histoquímica (IHQ) para o marcador de miofibroblasto: actina do musculo liso alfa (-SMA). Múltiplas combinações de IHQ foram realizadas para estudar a expressão e localização de TGF1, TGF2 e de componentes da MBE, incluindo colágeno tipo IV, laminina 3, laminina 5, perlecan e nidogênio-1. Image-J foi usado para quantificar a intensidade da expressão de -SMA e de TGF1 e TGF2 em três zonas distintas de interesse: epitélio apical, topografia da membrana basal do epitélio da córnea e estroma anterior. Microscopia confocal e Imaris foram utilizados para criação de imagens em 3D das IHC para componentes da MBE decórneas que apresentavam ou não fibrose 4 semanas após o PRK. RESULTADOS: O grupo -9D PRK apresentou expressão de -SMA (miofibroblastos) significativamente maior em comparação a córneas submetidas a -4.5D PRK (p=0.03), com a significativa perda de transparência corneana (haze tardio) ao exame de biomicroscopia, com pico após quatro semanas do PRK. Níveis significativamente maiores de TGF1 e TGF2 foram encontrados no estroma anterior de córneas submetidas a -9D de PRK em comparação com as córneas submetidas a -4.5D de PRK nas semanas que precedem o pico de aparecimento de miofibroblastos (p=0.03). Em contraste, níveis de TGF1 e TGF2 encontrados no epitélio apical e na localização da MBE foram significativamente maiores em córneas submetidas a -4.5D PRK em comparação a -9D PRK 3 semanas após as cirurgias (p=0.04 e p=0.03, respectivamente). 6 a 8 semanas após o PRK, não foi encontrado diferença estatisticamente significativa em relação à expressão de TGF1 e TGF2 entre os grupos, em nenhuma região avaliada. O estudo da regeneração dos componentes da MBE mostrou que a MBE lesionada após PRK se regenerou inicialmente em ambos os grupos, cerca de 4 dias após a cirurgia. Entretanto, 7 a 14 dias após a cirurgia, após inicial incorporação de perlecan na recém-regenerada MBE, houve disrupção do perlecan da localização da MBE, especialmente em córneas submetidas a -9D de PRK. A análise de córneas com 3 a 4 semanas de pós-operatório revelou que córneas que mantiveram sua transparência,apresentavam pouco ou nenhum miofibroblasto no estroma, e haviam regenerado todos os componentes da MBE, incluindo perlecan. No entanto, córneas opacas, apresentaram ausência de perlecan na topografia da MBE, e inúmeros miofibroblastos 3 a 4 semanas após a cirurgia, além de expressiva quantidade de colágeno tipo IV no estroma anterior. Embora miofibroblastos sintetizem perelcan, eles se mostraram incapazes de incorporá-lo na MBE em regeneração em córneas com fibrose. Com 6 a 8 semanas de pós-operatório, a transparência corneana foi reestabelecida mesmo em córneas previamente fibróticas, o que foi associado ao retorno do perlecan na topografia da MBE, desaparecimento dos miofibroblastos e reabsorção de matrix extracelular (MEC) desordenada. CONCLUSÃO: Defeito de barreira à fatores de crescimento exercido pelo epitélio apical e pelo perlecan da MBE permite que TGF1 e TGF2 adentrem o estroma corneano e conduzam a geração de miofibroblastos e a persistência da fibrose estromal após a lesão epitélio-estromal corneana provocada durante o PRK
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- Data da defesa: 30.10.2024
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ABNT
OLIVEIRA, Rodrigo Carlos de. Fibrose corneana em coelhos e sua relação com o defeito de regeneração das barreiras epiteliais ao influxo de Fator Transformador de Crescimento beta. 2024. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5149/tde-07042025-170208/. Acesso em: 04 dez. 2025. -
APA
Oliveira, R. C. de. (2024). Fibrose corneana em coelhos e sua relação com o defeito de regeneração das barreiras epiteliais ao influxo de Fator Transformador de Crescimento beta (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5149/tde-07042025-170208/ -
NLM
Oliveira RC de. Fibrose corneana em coelhos e sua relação com o defeito de regeneração das barreiras epiteliais ao influxo de Fator Transformador de Crescimento beta [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5149/tde-07042025-170208/ -
Vancouver
Oliveira RC de. Fibrose corneana em coelhos e sua relação com o defeito de regeneração das barreiras epiteliais ao influxo de Fator Transformador de Crescimento beta [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5149/tde-07042025-170208/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.5.2024.tde-07042025-170208 (Fonte: oaDOI API)
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