Otimização da detecção molecular de Leptospira spp patogênicas em amostras de urina de cães hígidos atendidos em campanhas de controle populacional na cidade de São Paulo (2024)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, LUCIANO MARCONDES DE - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- DOI: 10.11606/D.10.2024.tde-16122024-114753
- Subjects: CÃES; LEPTOSPIROSE; URINA
- Keywords: Leptospira spp; Dogs; Molecular Detection; Urine
- Language: Português
- Abstract: A qPCR utilizando o gene lipL32 como alvo molecular apresenta alta sensibilidade na identificação de animais portadores de espécies patogênicas de Leptospira spp. No entanto, a sua aplicação no diagnóstico da leptospirose canina enfrenta desafios relacionados à padronização das metodologias, especialmente no que diz respeito aos procedimentos de coleta, tratamento e armazenamento das amostras de urina, extração de DNA e ensaios de qPCR. O desenvolvimento de protocolos mais robustos e a realização de estudos comparativos são fundamentais para que a qPCR se consolide como uma ferramenta confiável na rotina diagnóstica da leptospirose em cães. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia de um ensaio de qPCR utilizando o agente intercalante EvaGreen, à base de corante fluorescente de DNA, tendo como alvo o gene lipL32, visando otimizar a detecção molecular de Leptospira spp patogênicas em amostras de urina de cães que apresentam eliminação renal do patógeno. Para tanto, o desempenho do referido ensaio foi comparado com um método de qPCR previamente testado e validado, considerado padrão-ouro, utilizando sonda de hidrólise. Dois métodos de extração de DNA também foram testados e comparados entre si. Um deles in house, baseado em esferas magnéticas, e outro, considerado padrão-ouro neste trabalho, oriundo de um kit comercial, baseado em colunas de centrifugação composta por sílica. Ao todo, foram coletadas amostras de 76 cães assintomáticos para leptospirose. O ensaio deqPCR utilizando EvaGreen® conseguiu detectar 1×10^[1] genomas equivalentes de Leptospirapor reação e amplificar especificamente o alvo lipL32, com temperaturas de melting variando entre 81,00 e 81,50C. Em comparação com o qPCR padrão-ouro, a sensibilidade diagnóstica do qPCR com EvaGreen foi de 47,7% (IC95% 27,3-68,3) e a especificidade foi de 94,7% (IC95% 85,6-98,2), resultando em um índice Kappa de concordância considerado moderado. Quando a extração de DNA foi realizada por método in house, em comparação ao método padrão-ouro utilizando colunas de sílica, a sensibilidade diagnóstica foi de 42,1% (IC95% 23,1-63,7) e a especificidade foi de 77,2% (IC95% 64,8-86,2), com um índice Kappa sem significância estatística. Assim, a baixa concordância entre os diferentes ensaios sugere a necessidade de uma revisão crítica dos protocolos utilizados, além da implementação de métodos complementares que possam aumentar a precisão diagnóstica. Apesar dessas limitações, os testes utilizados neste trabalho foram eficazes na detecção de portadores assintomáticos de Leptospira spp. patogênicas na população canina estudada, criando oportunidades para novos estudos epidemiológicos sobre a incidência do patógeno nas regiões de coleta
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.08.2024
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
OLIVEIRA, Luciano Marcondes de. Otimização da detecção molecular de Leptospira spp patogênicas em amostras de urina de cães hígidos atendidos em campanhas de controle populacional na cidade de São Paulo. 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-16122024-114753/. Acesso em: 31 dez. 2025. -
APA
Oliveira, L. M. de. (2024). Otimização da detecção molecular de Leptospira spp patogênicas em amostras de urina de cães hígidos atendidos em campanhas de controle populacional na cidade de São Paulo (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-16122024-114753/ -
NLM
Oliveira LM de. Otimização da detecção molecular de Leptospira spp patogênicas em amostras de urina de cães hígidos atendidos em campanhas de controle populacional na cidade de São Paulo [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-16122024-114753/ -
Vancouver
Oliveira LM de. Otimização da detecção molecular de Leptospira spp patogênicas em amostras de urina de cães hígidos atendidos em campanhas de controle populacional na cidade de São Paulo [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-16122024-114753/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.10.2024.tde-16122024-114753 (Fonte: oaDOI API)
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