Avaliação de provas moleculares isotérmicas para identificar a infecção por Leishmania infantum chagasi em cães e flebotomíneos (2024)
- Authors:
- Autor USP: VIOTI, GEOVANNA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- DOI: 10.11606/T.10.2024.tde-26022025-143148
- Subjects: CÃES; LEISHMANIOSE VISCERAL; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
- Keywords: Canine visceral leishmaniasis; Isothermal molecular diagnosis; LAMP; PCR
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Um desafio importante no controle da Leishmaniose Visceral (LV) é a falta de testes laboratoriais precisos para diagnosticar a infecção em cães, principal reservatório e fonte de infecção da Leishmania infantum chagasi. Os testes sorológicos, apesar de baratos e fáceis, têm sensibilidade insuficiente e não identificam necessariamente os cães transmissores. Por isso, as provas moleculares, como a PCR, que detectam diretamente o DNA do parasita, são mais eficazes. No entanto, seu alto custo devido especialmente à infraestrutura necessária limita sua aplicação. Uma alternativa são as provas moleculares isotérmicas, que são mais acessíveis, pois exigem equipamentos mais simples e possuem boa sensibilidade. Desta forma, este projeto buscou avaliar o desempenho da prova isotérmica LAMP (Loop mediated isothermal amplification) em amostras de linfonodo de cães. Para isso, 134 cães foram avaliados quanto à endemicidade, positividade em técnicas moleculares convencionais (nPCR com alvo para o ITS1), sorologia (TR-DPP® Biomanguinhos) e citologia de medula óssea. Foi possível caracterizar 93 cães, sendo 44 infectados e 49 não infectados. Foram desenhados 4 novos conjuntos de primers, com alvos para kDNA (LAMP-P04), k26 (LAMP-P42), ITS2 (LAMP-P241) e ITS1 (LAMP-P34). Cada conjunto foi testado com e sem betaína para minimizar reações inespecíficas. As reações ocorreram por 75 minutos, a 65ºC e a inativação da enzima Bst foi feita a 80ºC por 10 minutos. A sensibilidadeanalítica variou entre 5x10^[-3]- e 5X10^[-5] , com o conjunto LAMP-P34 sendo o único que atingiu o limiar de detecção em 5X10^[-5]- sem uso da betaína, e apenas o conjunto LAMP-P42 foi específica para L. infantum chagasi. O conjunto LAMP-P34 foi selecionado para avaliação quanto ao desempenho diagnóstico. Dos 93 cães caracterizados, a LAMP-P34 foi capaz de diagnosticar corretamente 37 cães infectados e 49 cães não infectados, atingindo uma sensibilidade e especificidade de 84,10% e 100,00%, respectivamente. Ainda, a LAMP-P34 apresentou concordância quase perfeita (k = 0,93; IC 95%, 0,821 a 0,986) em relação à prova molecular convencional de nPCR-ITS1. Este é o primeiro estudo no Brasil que aplica a técnica LAMP para diagnosticar LV em cães. A LAMP-P34 se mostrou uma alternativa interessante para a detecção de L. infantum chagasi em amostra de linfonodo de cães em relação à PCR convencional
- Imprenta:
- Data da defesa: 02.12.2024
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
VIOTI, Geovanna. Avaliação de provas moleculares isotérmicas para identificar a infecção por Leishmania infantum chagasi em cães e flebotomíneos. 2024. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-26022025-143148/. Acesso em: 01 abr. 2026. -
APA
Vioti, G. (2024). Avaliação de provas moleculares isotérmicas para identificar a infecção por Leishmania infantum chagasi em cães e flebotomíneos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-26022025-143148/ -
NLM
Vioti G. Avaliação de provas moleculares isotérmicas para identificar a infecção por Leishmania infantum chagasi em cães e flebotomíneos [Internet]. 2024 ;[citado 2026 abr. 01 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-26022025-143148/ -
Vancouver
Vioti G. Avaliação de provas moleculares isotérmicas para identificar a infecção por Leishmania infantum chagasi em cães e flebotomíneos [Internet]. 2024 ;[citado 2026 abr. 01 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-26022025-143148/ - Xenodiagnóstico em gatos domésticos (Felis catus) naturalmente infectados por Leishmania infantum
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