Vias de sinalização e de regulação das beta-lactamases de Chromobacterium violaceum (2024)
- Authors:
- Autor USP: ALVES, LUÍS GUSTAVO LARANJEIRO - FMRP
- Unidade: FMRP
- DOI: 10.11606/D.17.2024.tde-13052024-153046
- Subjects: ANTIBIÓTICOS; BACTÉRIAS PATOGÊNICAS; FATORES DE TRANSCRIÇÃO; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Chromobacterium violaceum; Chromobacterium violaceum; Antibiotic resistance; Antibióticos beta-lactâmicos; Beta-lactam antibiotics; Beta-lactamase enzymes; Enzimas beta-lactamases; Fatores de transcrição; Resistência a antibióticos; Signaling pathways; Transcription factors; Vias de sinalização
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Um dos maiores problemas de saúde pública é o aumento da resistência a antibióticos em bactérias patogênicas. Em todo o mundo, há uma alta prevalência de resistência aos antibióticos beta-lactâmicos mediada por enzimas beta-lactamases. Por produzir duas beta-lactamases cromossômicas, AmpC e CphA, a bactéria oportunista ambiental Chromobacterium violaceum é intrinsecamente resistente a vários antibióticos beta-lactâmicos. No entanto, pouco se sabe sobre as vias de sinalização e regulação destas enzimas nesta bactéria. Neste estudo, isolamos mutantes espontâneos resistentes ao antibiótico ceftazidima para elucidar como essas beta-lactamases são reguladas. Por antibiograma, confirmamos a resistência a vários outros beta-lactâmicos em 13 destes mutantes espontâneos. Em 12 deles, ocorreu a hiperexpressão dos genes ampC e cphA, conforme verificado por ensaios de beta-galactosidase. O sequenciamento de DNA dos três genes parálogos da amidase AmpD de C. violaceum, uma enzima envolvida na reciclagem do peptideoglicano, revelou mutações de diferentes tipos em AmpD1 (CV_0566) na maioria dos mutantes espontâneos, mas não em AmpD2 ou AmpD3. Mutantes nulos simples e combinados dos genes das três amidases foram obtidos. A hiperexpressão de ambas as beta-lactamases e a aumentada resistência aos beta-lactâmicos foram verificadas apenas nos mutantes com deleção de ampD1. Quando introduzido nos mutantes nulos ou espontâneos de ampD1, o gene ampD1 reverteu os fenótipos destes mutantes. A amidase AmpD1 de C. violaceum possui arquitetura única entre as amidases bacterianas com presença de um domínio N-terminal de acetiltransferase. Três mutantes espontâneos foram escolhidos para sequenciamento completo do genoma (WGS). Os resultados revelaram mutações nos genes CV_1820 (RNAse E), CV_2060 (RseB, regulador negativo de sigma E) e CV_3538 (IspG, enzima de síntese de isoprenóides), sugerindo novas vias potencialmente envolvidas naresistência aos antibióticos beta-lactâmicos. A mutação identificada por WGS na região intergênica do fator de transcrição CV_1922, na verdade, revelou-se um artefato decorrente da excisão do gene CV_1923, uma das cinco cópias de transposases encontradas em C. violaceum. Como alternativa, um ensaio de pull-down de afinidade ao DNA permitiu isolar diferentes proteínas que podem ser candidatos a reguladores transcricionais de ambas beta-lactamases. Em conclusão, nossos dados indicam que a ocorrência de mutações no gene da amidase AmpD1 é um mecanismo comum que leva a hiperexpressão das beta-lactamases AmpC e CphA e a alta resistência de C. violaceum a vários antibióticos beta-lactâmicos
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2024
- Data da defesa: 07.02.2024
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
ALVES, Luís Gustavo Laranjeiro. Vias de sinalização e de regulação das beta-lactamases de Chromobacterium violaceum. 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-13052024-153046/. Acesso em: 10 jan. 2026. -
APA
Alves, L. G. L. (2024). Vias de sinalização e de regulação das beta-lactamases de Chromobacterium violaceum (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-13052024-153046/ -
NLM
Alves LGL. Vias de sinalização e de regulação das beta-lactamases de Chromobacterium violaceum [Internet]. 2024 ;[citado 2026 jan. 10 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-13052024-153046/ -
Vancouver
Alves LGL. Vias de sinalização e de regulação das beta-lactamases de Chromobacterium violaceum [Internet]. 2024 ;[citado 2026 jan. 10 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-13052024-153046/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.17.2024.tde-13052024-153046 (Fonte: oaDOI API)
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