Produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 e utilização para detecção de Anticorpos em pacientes convalescentes (2023)
- Authors:
- Autor USP: BARBOSA, ANA PAULA - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- DOI: 10.11606/D.42.2023.tde-16072024-151947
- Subjects: MICROBIOLOGIA; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; COVID-19; WESTERN BLOTTING; IMUNOENSAIO; INTERLEUCINAS; CITOCINAS
- Keywords: citocinas; COVID-19; COVID-19; cytokines; ELISA; ELISA; Nucleocapsid; Nucleocapsídeo; Western Blotting; Western Blotting
- Language: Português
- Abstract: A crise global resultante da pandemia de COVID-19 oportunizou diversas lições para o enfrentamento das próximas pandemias. A testagem em massa de indivíduos suspeitos é uma importante ferramenta para a diminuição da transmissibilidade viral, visto que possibilita o isolamento social precoce de indivíduos infectados. A proteína do nucleocapsídeo de SARS-CoV-2, vírus causador da COVID-19, apresentou ótimo desempenho em ensaios sorológicos de detecção anticorpos em pacientes convalescentes, o que auxiliou a mapear indivíduos infectados assintomáticos ou com sintomas tardios. Os testes sorológicos permitiram a identificação de indivíduos infectados antes da vacinação, inclusive em lugares onde a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) não era praticada, o que interferiu na elaboração de medidas de saúde pública. Somado a isso, sabe-se que os piores prognósticos da COVID-19 estão relacionados à reação inflamatória exacerbada, causada pela produção e liberação excessiva, aguda e descontrolada de sinalizadores pró-inflamatórios, como as interleucinas IL-1, IL-6, IL-17 e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), que causam dano no epitélio respiratório. As proteínas virais produzidas na célula infectada parecem interferir na resposta imune do hospedeiro, inibindo mecanismos inatos de defesa e regulação da resposta inflamatória. A produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 podem viabilizar o desenvolvimento de testes sorológicos com maior sensibilidade e especificidade além auxiliar a elucidar os mecanismos de liberação de citocinas inflamatórias em estudos in vitro.Este trabalho iniciou-se com o desenho de variadas construções para produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 para inferir a imunogenicidade através da avaliação da capacidade de detecção de anticorpos no soro de pacientes convalescentes de COVID-19 pelas metodologias de Western Blotting e ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay). As proteínas recombinantes solúveis produzidas foram 3CLpro, Nsp8, Nucleocapsídeo e seus fragmentos N e C-terminal. Destas, apenas a proteína Nucleocapsídeo e seus fragmentos apresentaram resultados relevantes na detecção de anticorpos no soro de pacientes convalescentes de COVID-19 por Western Blotting e ELISA, com destaque para a sensibilidade e especificidade resultante pelo último método para a proteína inteira (98% e 95%, respectivamente). As proteínas recombinantes 3CLpro, Nsp8, Nucleocapsídeo também foram incubadas em cultura de macrófagos para avaliação da liberação de TNF-alfa, IL-1, e IL-17 relacionadas à tempestade de citocinas observadas em pacientes graves de COVID-19. Esta análise foi prejudicada devido à presença de endotoxinas bacterianas nas proteínas recombinantes em questão, o que poderia interferir nos resultados obtidos, sendo necessária a implementação de novos processos de purificação antes de novos ensaios
- Imprenta:
- Data da defesa: 18.12.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
BARBOSA, Ana Paula. Produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 e utilização para detecção de Anticorpos em pacientes convalescentes. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-16072024-151947/. Acesso em: 30 dez. 2025. -
APA
Barbosa, A. P. (2023). Produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 e utilização para detecção de Anticorpos em pacientes convalescentes (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-16072024-151947/ -
NLM
Barbosa AP. Produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 e utilização para detecção de Anticorpos em pacientes convalescentes [Internet]. 2023 ;[citado 2025 dez. 30 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-16072024-151947/ -
Vancouver
Barbosa AP. Produção de proteínas recombinantes de SARS-CoV-2 e utilização para detecção de Anticorpos em pacientes convalescentes [Internet]. 2023 ;[citado 2025 dez. 30 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-16072024-151947/ - Obtaining a high titer of polyclonal antibodies from rats to the SARS-CoV-2 nucleocapsid protein and its N- and C-terminal domains for diagnostic test development
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Informações sobre o DOI: 10.11606/D.42.2023.tde-16072024-151947 (Fonte: oaDOI API)
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