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Tese

A ativação prolongada da subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B sustenta o efeito persistente dos produtos de glicação avançada sobre a sensibilização inflamatória em macrófagos (2024)

  • Authors:
  • Autor USP: ASSIS, SAYONARA IVANA SANTOS DE - FM
  • Unidade: FM
  • DOI: 10.11606/D.5.2024.tde-03072024-122500
  • Subjects: ARTERIOSCLEROSE; INFLAMAÇÃO; DIABETES MELLITUS; LIPOPOLISSACARÍDEOS
  • Keywords: Advanced glycated end products; Atherosclerosis; Diabetes mellitus; Inflammation; Lipopolysaccharides; NF-kappa-B
  • Language: Português
  • Abstract: Produtos de glicação avançada (AGE) induzem estresse inflamatório por intermédio da ativação do fator nuclear NF-kappa-B (NFKB), mediante ligação ao receptor para AGE (RAGE). A sinalização do RAGE converge com a do receptor 4 do tipo toll (TLR4) e os AGE sensibilizam macrófagos à estimulação inflamatória por lipopolissacarídeos (LPS). Este efeito é sustentado em macrófagos, persistindo mesmo após longo tempo em meio isento de AGE e são dependentes do controle glicêmico em indivíduos com diabetes mellitus (DM). Testou-se a hipótese de que a persistência da ação da albumina-AGE seja decorrente da ativação nuclear sustentada de NFKB. Sendo assim, determinou-se em macrófagos, tratados com albumina controle (C) e albumina-AGE, o tempo de persistência da sensibilização à estimulação inflamatória por LPS inferido pela 1) secreção de citocinas inflamatórias; 2) conteúdo nuclear das subunidades de NFKB, p50 e p65; 3) expressão de genes inflamatórios. A albumina-AGE foi preparada in vitro pela incubação com glicolaldeído 10mM, durante 4 dias a 37ºC, no escuro e a albumina-C, incubada apenas com solução tampão-fosfato. Macrófagos da linhagem RAW-264.7 sobrecarregados, por 24h com lipoproteínas de densidade baixa (LDL) acetilada, foram tratados com albumina-C ou AGE (2 mg/mL, 48 h), na presença ou ausência de HDL. A seguir, foram mantidos em meio isento dessas albuminas por diferentes intervalos de tempo e, posteriormente, incubadas por 24 h com LPS. Foram determinadas a expressãogênica de RelA, Nfkb1, Ager, Tlr4, IL6, TNF, Abca1 e Abcg1 por RT-qPCR, o conteúdo nuclear de p50 e p65 por Western blot e a secreção de citocinas inflamatórias TNF, IL-6 e IL-1beta, por ELISA. As comparações foram feitas por ANOVA de um fator ou teste t de Student (n=6). A albumina-AGE sensibilizou os macrófagos à estimulação por LPS, favorecendo maior secreção de TNF, IL-6 e IL-1 beta em, respectivamente, 1,5%, 9,4%, 5,6% em comparação à albumina-C (tempo zero). O aumento na secreção de TNF, IL-6 e IL-1beta permaneceu, respectivamente, até 24 h, 24 h e 12 h, mesmo após a remoção da albumina-AGE do meio, com uma área sob a curva maior em 1,6, 16 e 5,2 vezes, respectivamente; a incubação na presença de HDL não alterou o perfil inflamatório persistente. A expressão dos genes Il6 e RelA, (após 8 h da remoção das albuminas do meio de cultura) Il6 e Abca1 (após 24 h da remoção das albuminas do meio de cultura) foi maior nas células tratadas com albumina-AGE, em comparação à albumina-C. O conteúdo nuclear de p50 foi semelhante entre os grupos, mas o p65 permaneceu aumentado 2,9 vezes, por até 24 h, nas células tratadas com albumina-AGE em comparação à albumina-C. Os resultados evidenciam que a ativação prolongada da subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B sustenta o efeito persistente dos AGE sobre alteração na expressão gênica e a secreção de citocinas inflamatórias em macrófagos desafiados com LPS, o que contribui para a memória metabólica celular
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 18.03.2024
    • Acesso à fonteAcesso à fonteDOI

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    Status:
    Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
    Versão do Documento:
    Versão publicada (Published version)
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    How to cite
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    • ABNT

      ASSIS, Sayonara Ivana Santos de. A ativação prolongada da subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B sustenta o efeito persistente dos produtos de glicação avançada sobre a sensibilização inflamatória em macrófagos. 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-03072024-122500/. Acesso em: 02 abr. 2026.

    • APA

      Assis, S. I. S. de. (2024). A ativação prolongada da subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B sustenta o efeito persistente dos produtos de glicação avançada sobre a sensibilização inflamatória em macrófagos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-03072024-122500/

    • NLM

      Assis SIS de. A ativação prolongada da subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B sustenta o efeito persistente dos produtos de glicação avançada sobre a sensibilização inflamatória em macrófagos [Internet]. 2024 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-03072024-122500/

    • Vancouver

      Assis SIS de. A ativação prolongada da subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B sustenta o efeito persistente dos produtos de glicação avançada sobre a sensibilização inflamatória em macrófagos [Internet]. 2024 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-03072024-122500/

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