Desenvolvimento e avaliação de imunobiológicos para o diagnóstico sorológico de arboviroses (2023)
- Authors:
- Autor USP: PEREIRA, SAMUEL SANTOS - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- DOI: 10.11606/T.42.2023.tde-15072024-145720
- Subjects: VÍRUS DA DENGUE; DENGUE; ARBOVÍRUS; INFECÇÕES POR ARBOVIRUS; VÍRUS DE RNA; ELISA; PROTEÍNAS; TESTES SOROLÓGICOS
- Keywords: Dengue; Dengue; Diagnóstico sorológico; Domain III (EDIII); Domínio III (EDIII); Non-structural protein 1 (NS1); Proteína Não Estrutural 1 (NS1); Serological diagnosis
- Language: Português
- Abstract: O vírus Dengue pertence à família Flaviviridae sendo de relevante impacto na saúde pública mundial. O diagnóstico laboratorial é uma importante ferramenta para a identificação específica dos casos de dengue. Os testes sorológicos para detecção de anticorpos IgM e IgG são amplamente utilizados no diagnóstico laboratorial da dengue. No entanto, devido à elevada semelhança antigênica entre os Flavivírus, há forte comprometimento da especificidade dos testes sorológicos comerciais. Além disso, a re-emergência de alguns Flavivírus, como o vírus Zika, torna o diagnóstico laboratorial desafiador. O objetivo desse trabalho foi avaliar imunobiológicos recombinantes derivados das proteínas Não Estrutural 1 (NS1) e do Envelope (E) dos DENVs 1-4 para o diagnóstico sorológico de infecções prévias pelos DENVs. Os antígenos recombinantes ΔNS1 e EDIII foram construídos a partir das proteínas NS1 e E dos DENVs 1-4. Esses antígenos foram expressos em Escherichia coli e purificados por cromatografia. A antigenicidade foi confirmada por ELISA com soros anti-DENV, demonstrando que as proteínas obtidas preservam epítopos semelhantes aos das proteínas nativas. Inicialmente, avaliamos a combinação das proteínas ΔNS1 1 DENVs para diagnóstico da dengue na plataforma de ELISA. Os resultados dos testes indicaram sensibilidade de 79-82% e especificidade de 79-93%. Desenvolvemos também um antígeno poliepítopo baseado na fusão das ΔNS1 dos quatro tipos de DENV e denominado de T-ΔNS1.Essa proteína foi expressa, purificada e reconhecida por soros anti-DENV. A performance da T-ΔNS1 em ensaio de ELISA determinou sensibilidade de 77,42% e especificidade de 88,57%. Ao final, investigamos o uso da combinação das proteínas EDIII DENVs 1-4 em ensaio de ELISA. A performance do ensaio indicou sensibilidade de 88% e especificidade de 91%. As EDIII foram utilizadas também em plataforma de diagnóstico multiplex, e a prova de conceito inicial indicou que elas podem ser aplicadas nessa plataforma de diagnóstico. As ΔNS1 e EDIII DENVs 1-4 foram avaliadas também para diferenciação dos sorotipos. Em análise com amostras de soro de animais infectados observamos maior reatividade da proteína com o soro anti-DENV homólogo, particularmente as proteínas EDIII. Os resultados obtidos com as amostras de soro humano permitiram diferenciar respostas anti-DENV 1 de outros sorotipos com as proteínas EDIII, confirmando a aplicabilidade dessas proteínas para diferenciação de infecção com os diferentes tipos de DENVs. Em conjunto, os resultados obtidos nesse estudo confirmam que os antígenos recombinantes podem ser utilizados como imunobiológicos em testes de diagnóstico da dengue, combinando sensibilidade e especificidade. Os resultados contribuem para a produção de conhecimento científico na área, mas também, abrem perspectivas de desenvolvimento dos novos imunobiológicos para de kits de diagnóstico sorológico para a dengue
- Imprenta:
- Data da defesa: 14.12.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
PEREIRA, Samuel Santos. Desenvolvimento e avaliação de imunobiológicos para o diagnóstico sorológico de arboviroses. 2023. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-15072024-145720/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Pereira, S. S. (2023). Desenvolvimento e avaliação de imunobiológicos para o diagnóstico sorológico de arboviroses (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-15072024-145720/ -
NLM
Pereira SS. Desenvolvimento e avaliação de imunobiológicos para o diagnóstico sorológico de arboviroses [Internet]. 2023 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-15072024-145720/ -
Vancouver
Pereira SS. Desenvolvimento e avaliação de imunobiológicos para o diagnóstico sorológico de arboviroses [Internet]. 2023 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-15072024-145720/ - Desenvolvimento de novas estratégias de diagnóstico sorológico para tipagem da infecção prévia pelo vírus Dengue
- The third vaccine dose significantly reduces susceptibility to the B.1.1.529 (Omicron) SARS-CoV-2 variant
- Nanovaccine based on self-assembling nonstructural protein 1 boosts antibody responses to Zika virus
- Specificity of NS1-based immunochromatographic tests for dengue virus with regard to the Zika virus protein
- Diagnostic and vaccine potential of Zika virus envelope protein (E) derivates produced in bacterial and insect cells
- The Anti-Dengue Virus Peptide DV2 inhibits Zika Virus both in vitro and in vivo
- Novel antigenic proteins of Mycoplasma agalactiae as potential vaccine and serodiagnostic candidates
- Transcutaneous administration of dengue vaccines
- Serotype-specific dengue virus IgG assay using EDIII-based recombinant proteins and its application in an endemic population in northeast Brazil
- NS1-based ELISA test efficiently detects dengue infections without cross-reactivity with Zika virus
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.42.2023.tde-15072024-145720 (Fonte: oaDOI API)
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