Estabelecimento da metodologia CRISPR/Cas9 e obtenção de plantas knockout para genes candidatos a reguladores do splicing alternativo sob estresse térmico em arroz (Oryza sativa L.) (2024)
- Authors:
- Autor USP: SERVILHA, JOÃO HENRIQUE - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIB
- DOI: 10.11606/D.41.2024.tde-28062024-115330
- Subjects: RIZICULTURA; EXPRESSÃO GÊNICA; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Alternative Splicing; CRISPR/Cas9; CRISPR/Cas9; Oryza sativa L; Oryza sativa L; Splicing Alternativo
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O arroz é um dos alimentos mais consumidos no mundo, mas o estresse térmico afeta seu rendimento e qualidade dos grãos. Para identificar soluções mecanísticas que melhorem essa cultura diante das ameaças das mudanças climáticas, as respostas moleculares da termotolerância devem ser identificadas. O splicing alternativo de pré-mRNAs é um dos mecanismos envolvidos na resposta das plantas contra estresses, mas pouco se sabe sobre como a variação de isoformas transcritas é regulada por mudanças de temperatura. Os genes de arroz LOC_Os02g40900 e LOC_Os05g30140 são candidatos a reguladores de splicing sensíveis ao calor. Para investigar essa hipótese, foram gerados plasmídeos com base na metodologia CRISPR/Cas9 visando editar esses genes em plantas de arroz. Utilizando a estratégia de duplo direcionamento, foram escolhidas duas sequências-alvo na região codificante de cada gene. Essas sequências-alvo foram inseridas em vetores de expressão de plantas via PCR, subclonagem e Golden Gate Assembly.Os plasmídeos adequados foram confirmados por sequenciamento de Sanger e então inseridos em Agrobacterium, sendo confirmados por PCR de colônias. Para a transformação de plantas, calos de arroz foram obtidos induzindo a divisão de embriões indiferenciados em sementes de arroz. Após a indução e subcultivo dos calos, ocorreu a transformação via Agrobacterium, permitindo que os calos resistentes ao agente seletivo prosseguissem para o meio de regeneração, gerando plantas transgênicas, confirmadas por PCR e sequenciamento de Sanger para, pelo menos, uma das edições esperadas.
- Imprenta:
- Data da defesa: 22.04.2024
- Este periódico é de acesso aberto
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
SERVILHA, João Henrique. Estabelecimento da metodologia CRISPR/Cas9 e obtenção de plantas knockout para genes candidatos a reguladores do splicing alternativo sob estresse térmico em arroz (Oryza sativa L.). 2024. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2024. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41132/tde-28062024-115330/. Acesso em: 24 dez. 2025. -
APA
Servilha, J. H. (2024). Estabelecimento da metodologia CRISPR/Cas9 e obtenção de plantas knockout para genes candidatos a reguladores do splicing alternativo sob estresse térmico em arroz (Oryza sativa L.) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41132/tde-28062024-115330/ -
NLM
Servilha JH. Estabelecimento da metodologia CRISPR/Cas9 e obtenção de plantas knockout para genes candidatos a reguladores do splicing alternativo sob estresse térmico em arroz (Oryza sativa L.) [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41132/tde-28062024-115330/ -
Vancouver
Servilha JH. Estabelecimento da metodologia CRISPR/Cas9 e obtenção de plantas knockout para genes candidatos a reguladores do splicing alternativo sob estresse térmico em arroz (Oryza sativa L.) [Internet]. 2024 ;[citado 2025 dez. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41132/tde-28062024-115330/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.41.2024.tde-28062024-115330 (Fonte: oaDOI API)
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