Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131 (2023)
- Authors:
- Autor USP: POMIN, STEPHANIE ANGELO - IPEN
- Unidade: IPEN
- DOI: 10.11606/D.85.2023.tde-28032024-141048
- Subjects: HORMÔNIOS HIPOFISÁRIOS; BIOLOGIA CELULAR; CITOLOGIA ANIMAL; TUMOR CARCINOIDE; GONADOTROFINAS; RADIOTRAÇADORES; IODO
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A prolactina humana é uma proteína hormonal de 23 kDa produzida principalmente pela glândula pituitária, e desempenha várias funções biológicas, como por exemplo: regulação do sistema imunológico, hematopoiese e indução da lactação. No entanto, alterações em seu nível sérico estão diretamente associadas ao desenvolvimento de tumores de mama, próstata e ovário. O objetivo desse estudo foi a produção de hPRL recombinante, contendo 6 histidinas residuais e uma metionina na região N-terminal, que pudesse ser marcada com o radioisótopo I^[131] para uso como uma ferramenta diagnóstica de cânceres relacionados a prolactina. Neste estudo, a hPRLhis foi produzida no citoplasma de bactérias E. coli e os corpos de inclusão gerados foram solubilizados sob alta pressão hidrostática. Foi utilizado o plasmídeo pET28a(+) com o cDNA da prolactina humana na cepa BL21(DE3). Os corpos de inclusão foram isolados e lavados. Diversas condições de solubilização foram testadas, incluindo diferentes níveis de pH e agentes redutores. A proteína foi caracterizada e sua atividade biológica foi avaliada usando células BaF/3-LLP. A radiomarcação com ^[131]I seguiu o método de marcação direta. A prolactina humana (hPRL) foi renaturada com sucesso em condições de alta pressão (2,4 kBar) e pH 10 com incubação por 16 horas em GSSH e GSH. Cerca de 3 mg de prolactina foram obtidos a partir deste processo em um volume total de 5 mL de meio dialisado. A radiomarcação da proteína atingiu um rendimento de até 75%com 100 μCi de Iodo e 10 μg de CLT. Este estudo estabeleceu as condições para produzir hPRLhis no citoplasma bacteriano usando renaturação de alta pressão. A hPRLhis demonstrou alto nível de expressão, pureza e atividade biológica, confirmada em ensaios com células. Além disso, foi radiomarcada para futuras pesquisas com receptores em células tumorais
- Imprenta:
- Data da defesa: 29.11.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
POMIN, Stephanie Angelo. Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28032024-141048/. Acesso em: 09 jan. 2026. -
APA
Pomin, S. A. (2023). Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28032024-141048/ -
NLM
Pomin SA. Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131 [Internet]. 2023 ;[citado 2026 jan. 09 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28032024-141048/ -
Vancouver
Pomin SA. Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131 [Internet]. 2023 ;[citado 2026 jan. 09 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28032024-141048/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.85.2023.tde-28032024-141048 (Fonte: oaDOI API)
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