Padronização da técnica SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) utilizando a proteína Cas13a para diagnóstico do Vírus Respiratório Sincicial em pacientes pediátricos (2023)
- Authors:
- Autor USP: SOARES, CAMILA PEREIRA - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- DOI: 10.11606/D.42.2023.tde-07062024-145303
- Subjects: DOENÇAS RESPIRATÓRIAS; INFECÇÕES RESPIRATÓRIAS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; COVID-19; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; ELISA; IMUNOGLOBULINAS
- Keywords: CRISPR-Cas; CRISPR-Cas; Diagnosis; Diagnóstico; ELISA; ELISA; RSV; RSV; SARS-CoV-2; SARS-CoV-2
- Language: Português
- Abstract: O RSV é um vírus amplamente distribuído no mundo e é o principal vírus envolvido em infecções respiratórias do trato inferior. A principal população de risco dessas infecções são crianças menores de 5 anos. Nesse contexto, os métodos de diagnósticos laboratoriais se apresentam extremamente importantes devido a similaridade entre os sintomas causados pela infecção do RSV com outros vírus respiratórios. Esse trabalho propôs utilizar a enzima LwCas13a como detectora do RSV em amostras de pacientes pediátricos tendo como base a técnica SHERLOCK. A proteína recombinante foi obtida utilizando cromatografia de afinidade e gel filtração para purificação. O RNA alvo foi desenhado com base em uma região conservada no gene M do RSV. Em amostras clínicas previamente amplificadas por PCR convencional, 100% foram detectadas pela enzima e em amostras sem amplificação prévia 45,3% foram detectadas. Não houve reação cruzada em nenhum dos testes com outros vírus de importância respiratória. Durante o enfrentamento à Covid-19 em 2020 e 2021, produzimos um teste de ELISA para detectar anticorpos IgG/IgA/IgM contra duas nucleoproteínas recombinantes, uma comercial e uma produzida in house. Os teste foi padronizado em comparação ao ensaio padrão ouro de neutralização viral (VNT100 ). Para todas as três imunoglobulinas obtivemos valores acima de 88% de sensibilidade e 94% de especificidade. O ensaio foi empregado na triagem de doadores e receptores de plasma convalescente, no diagnóstico fornecido para 7 hospitais público da cidade de São Paulo. Além disso, padronizamos um ensaio ELISA para IgG utilizando sangue capilar seco coletado em papel de filtro. Na tentativa de facilitar a coleta de amostras em um cenário de pandemia.
- Imprenta:
- Data da defesa: 06.06.2023
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
SOARES, Camila Pereira. Padronização da técnica SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) utilizando a proteína Cas13a para diagnóstico do Vírus Respiratório Sincicial em pacientes pediátricos. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-07062024-145303/. Acesso em: 31 mar. 2026. -
APA
Soares, C. P. (2023). Padronização da técnica SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) utilizando a proteína Cas13a para diagnóstico do Vírus Respiratório Sincicial em pacientes pediátricos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-07062024-145303/ -
NLM
Soares CP. Padronização da técnica SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) utilizando a proteína Cas13a para diagnóstico do Vírus Respiratório Sincicial em pacientes pediátricos [Internet]. 2023 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-07062024-145303/ -
Vancouver
Soares CP. Padronização da técnica SHERLOCK (Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking) utilizando a proteína Cas13a para diagnóstico do Vírus Respiratório Sincicial em pacientes pediátricos [Internet]. 2023 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-07062024-145303/ - Development and validation of an enzyme-linked immunoassay kit for diagnosis and surveillance of COVID-19
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