Transfecção celular de anti-miR-21 aplicada em linhagem de carcinoma renal de células claras metastáticas (2023)
- Authors:
- Autor USP: NUNES, VITORIA GHAZARIAN - FM
- Unidade: FM
- DOI: 10.11606/D.5.2023.tde-16042024-122202
- Assunto: MICRORNAS
- Keywords: Clear Cell Renal Carcinoma; Metastasis; MicroRNA (miRNAs); MMP9; RECK; Transfection
- Language: Português
- Abstract: INTRODUÇÃO: O Carcinoma de Células Renais, é uma neoplasia maligna que se origina no revestimento do túbulo contorcido proximal e durante décadas, pacientes com câncer renal, em sua maioria, submetem-se à nefrectomia radical ou parcial, devido as poucas opções de tratamento. O miR-21, é um microRNA que já foi associado ao crescimento celular e a inibição da apoptose em alguns tipos de câncer e em relação ao carcinoma de células renais, já foi demonstrada uma superexpressão deste miRNA sendo ainda mais relevante no tipo células claras, onde também já foi associado a um pior prognóstico. O miR-21 possui diversos genes alvos, como RECK e MMP9 que podem atuar em processos carcinogênicos. Com o aumento da exploração de estudos acerca da importância dos miRNAs, novas modalidades terapêuticas são desenvolvidas e, dentre elas, surgem os anti- miRs, que são ácidos nucleicos de cadeia simples modificados e sintetizados para se ligarem especificamente ao miRNA de interesse e inibir essas moléculas, levando ao objetivo da perda de expressão. OBJETIVOS: Baseado no potencial oncogênico do miR-21 realizamos a padronização da transfecção de anti-miR-21 em linhagem celular de carcinoma renal de células claras metastáticas (Caki-1), bem como a análise de expressão do miR-21 e de seus genes alvo (RECK e MMP9) pós transfecção. Por fim, realizamos ensaio de migração e imunofluorescência após a transfecção de anti-miR-21. METODOLOGIA: Inicialmente, cultivamos a linhagem Caki-1 em meio de culturaMcCoy's 5a Medium Modified, suplementado com soro fetal bovino a 10% e solução antibiótica e antimicótica, após o cultivo realizamos a transfecção da linhagem com anti-miR-21 e realizamos a análise de expressão do miR e de seus genes alvo por meio da técnica de qPCR. Também realizamos ensaio de migração e imunoflorescência. Por fim, realizamos análise estatística considerando estatisticamente significantes os resultados com p-valor inferior a 5%. RESULTADOS:. Observamos uma diminuição estatisticamente significante da expressão do miR-21 demonstrando a eficácia da transfecção, além da diminuição da migração celular. Em relação ao gene alvo RECK, demonstramos um aumento significativo da expressão após a transfecção conforme esperado, entretanto o seu gene alvo MMP9 estava superexpresso após a transfecção, embora sem significância estatística. No ensaio de imunoflorescência evidenciamos aumento de expressão de RECK e diminuição de MMP9. DISCUSSÃO: Observamos que com a técnica de tranfecção de anti-miR-21, foi possível, efetuar a diminuição significativa da expressão do miR-21, assim como o aumento de expressão gênica e proteica de RECK, bem como diminuição proteica de MMP9, além da importante diminuição do potencial de migração da linhagem. Dessa forma, consideramos nossos resultados in vitro promissores, pois o miR-21 pode apresentar um papel importante para a progressão do câncer de rim metastático. Nosso trabalho demonstra que essa ferramenta de transfecção pode contribuircom o knockdown do miR-21 no CRCC e retardar sua migração celular. CONCLUSÃO: Concluímos que a metodologia utilizada para padronização da transfecção de anti-miR-21 foi efetiva, no qual as células apresentaram diminuição significante de miR-21 em relação ao controle, assim como um aumento de expressão do seu alvo RECK, porém não apresentou diferença entre MMP9 e controle. Identificamos uma diminuição no potencial de migração da linhagem estudada
- Imprenta:
- Data da defesa: 13.12.2023
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo NÃO é de acesso aberto
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ABNT
NUNES, Vitoria Ghazarian. Transfecção celular de anti-miR-21 aplicada em linhagem de carcinoma renal de células claras metastáticas. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-16042024-122202/. Acesso em: 26 jan. 2026. -
APA
Nunes, V. G. (2023). Transfecção celular de anti-miR-21 aplicada em linhagem de carcinoma renal de células claras metastáticas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-16042024-122202/ -
NLM
Nunes VG. Transfecção celular de anti-miR-21 aplicada em linhagem de carcinoma renal de células claras metastáticas [Internet]. 2023 ;[citado 2026 jan. 26 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-16042024-122202/ -
Vancouver
Nunes VG. Transfecção celular de anti-miR-21 aplicada em linhagem de carcinoma renal de células claras metastáticas [Internet]. 2023 ;[citado 2026 jan. 26 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-16042024-122202/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.5.2023.tde-16042024-122202 (Fonte: oaDOI API)
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