The influence of ovarian follicular niche on oocyte development (2023)
- Authors:
- Autor USP: PAIXÃO, JOÃO VITOR PUTTINI - FZEA
- Unidade: FZEA
- Sigla do Departamento: ZMV
- DOI: 10.11606/D.74.2023.tde-28022024-153212
- Subjects: BOVINOS; OÓCITOS; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO; RNA
- Keywords: Exosomes; Exossomos; GSK3β; RNA-Seq
- Agências de fomento:
- Language: Inglês
- Abstract: Os exossomos (Exos), vesículas extracelulares pequenas, presentes no fluido folicular (FF), atuam na comunicação intercelular, transportando conteúdos bioativos, como mRNAs e lnc-RNAs, contribuindo para a maturação do ovócito. Assim sendo, especula-se que Exos presentes no fluido de folículos contendo oócitos de boa qualidade ou má qualidade são distintos no seu conteúdo de RNA. O primeiro objetivo deste trabalho foi compreender, detalhadamente, a relação entre o contéudo de RNAs poli-adenilados de Exos oriundos do FF, e o desenvolvimento oocitário e embrionário. Para tanto, Exos do FF foram coletados e isolados de folículos com diâmetro de 3 a 6 mm, utilizando um modelo retrospectivo bovino previamente descrito. Para rastrear sua competência, o FF e o ovócito foram recuperados individualmente através da dissecção de folículos oriundos ovários, selecionados aleatoriamente, de abatedouros. Os gametas foram maturados, ativados partenogeneticamente e cultivados individualmente por 7 dias. Com base nos registros de desenvolvimento, os ovócitos e seus respectivos fluidos foliculares foram classificados e separados em três grupos, de acordo com a competência de desenvolvimento: Grupo NCLEAV (Incompetente Maduro): Ovócitos maduros in vitro que não se dividiram após a ativação partenogenética; Grupo CLEAV (Incompetente Clivado): Ovócitos que se dividiram após a ativação, mas bloquearam o desenvolvimento no 3º ou 4º ciclo celular; Grupo BLAST (Blastocistos): oócitos que sedesenvolveram até o estágio de blastocisto. Foram realizadas análises de expressão gênica diferencial, genes exclusivos e genes centrais a partir dos dados transcriptômicos, e diferenças transcricionais entre os grupos mais competentes (BLAST) e menos competentes (CLEAV e NCLEAV) (p-ajust.<0.1) foram observadas. Interessantemente, vários transcritos gênicos encontrados significativamente alterados entre esses grupos estavam relacionados a vias de sinalização associadas à proliferação celular e modulação da meiose, como as vias de sinalização WNT, PI3K-Akt e Hippo. Devido à sua função fundamental em todas essas vias, a GSK3 (Glicogênio Sintase Quinase 3) foi selecionada como proteína candidata que potencialmente regula essas vias de sinalização e a competência do ovócito. Para testar isso, os ovócitos foram maturados sob três condições: 1) CTL (controle); 2) Tratamento com DKK1, que estimula indiretamente a GSK3β através da inibição da via de sinalização WNT pelo DKK-1 (proteína relacionada ao Dickkopf 1); 3) Tratamento com CHIR, que inibe diretamente a GSK3β através da sonda química CHIR99021. Foram observadas taxas de extrusão de corpúsculo polar, e os ovócitos maduros foram ativados partenogeneticamente e cultivados in vitro. O grupo CHIR apresentou uma maior taxa de maturação em comparação com as outras, mas não foram observadas diferenças na clivagem e no desenvolvimento a blastocisto. Para melhor compreender o efeito de inibição, a β-catenina foilocalizada por imunocitoquímica, e uma maior localização nuclear foi observada novamente no grupo CHIR. Em conclusão, o modelo retrospectivo identificou genes e vias presentes em Exos derivados de FF que estão associadas à competência do oócito. A modulação da GSK3β nos COCs aumentou a taxa de extrusão do 1º corpúsculo polar enquanto as demais taxas não apresentaram alterações estatísticas. Contudo, as características da modificação induzida pela inibição da GSK3β foram semelhantes às observadas in vivo em ovócitos humanos
- Imprenta:
- Publisher place: Pirassununga
- Date published: 2023
- Data da defesa: 24.08.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
PAIXÃO, João Vitor Puttini. The influence of ovarian follicular niche on oocyte development. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-28022024-153212/. Acesso em: 28 set. 2024. -
APA
Paixão, J. V. P. (2023). The influence of ovarian follicular niche on oocyte development (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Pirassununga. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-28022024-153212/ -
NLM
Paixão JVP. The influence of ovarian follicular niche on oocyte development [Internet]. 2023 ;[citado 2024 set. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-28022024-153212/ -
Vancouver
Paixão JVP. The influence of ovarian follicular niche on oocyte development [Internet]. 2023 ;[citado 2024 set. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-28022024-153212/ - A influência do nicho folicular sobre o desenvolvimento
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Informações sobre o DOI: 10.11606/D.74.2023.tde-28022024-153212 (Fonte: oaDOI API)
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