O ensaio de interferência de proteínas oligoméricas como método de validação de alvos antimaláricos (2019)
- Authors:
- Autor USP: BATISTA, FERNANDO DE ASSIS - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMP
- DOI: 10.11606/T.42.2019.tde-02022024-183635
- Subjects: PLASMODIUM FALCIPARUM; MALÁRIA; ASPARTATO CARBAMOILTRANSFERASE; ANTIMALÁRICOS; WESTERN BLOTTING
- Keywords: Plasmodium falciparum; Ensaio de Interferencia de Proteina; Aspartaatmetabolisme, validatie van geneesmiddeldoelen; Metabolismo de Aspartato; Plasmodium falciparum; Protein Interference Assay; Validacao de Alvos Terapeuticos
- Language: Português
- Abstract: A malária e uma das infecções humanas mais prevalentes em todo o mundo, com mais de 40% da população mundial vivendo em áreas endêmicas. Na ausência de uma vacina eficaz, o surgimento de cepas resistentes aos medicamentos existentes requer desenvolvimento urgente de novos medicamentos. Os metodos atuais aplicados a validação de alvos terapeuticos, um passo crucial no desenvolvimento de farmacos, possuem varias limitacoes em malaria. O objetivo deste estudo foi avaliar se os desafios encontrados no processo de validacao de alvos antimalaricos podem ser abordados pela incorporacao de subunidades proteicas mutantes a complexos de proteínas oligomericas do organismo-alvo in vivo. Foram realizados experimentos com mutantes que, baseados em estruturas cristalograficas, poderiam interferir nas interacoes inter-oligomericas das enzimas aspartato aminotransferase (PfAspAT), malato desidrogenase (PfMDH) e aspartato transcarbamoilase (PfATC) de P. falciparum. O efeito dessas mutacoes na atividade enzimática foi avaliado por medicoes de atividade especifica. A capacidade das enzimas mutantes de formar um complexo com as suas respectivas formas selvagem foi avaliada por experimentos de coexpressao/ purificacao seguidas por analise por Western blot. O efeito na proliferacao foi avaliado pelo monitoramento do crescimento de parasitas cultivados em meio RPMI normal e com baixa concentracao de aspartato.Através do rompimento de interfaces oligomericas utilizando subunidades mutantes dasenzimas alvo, demonstramos claramente uma reducao significativa na atividade enzimatica especifica in vitro e em ensaios whole cell. Alem disso, demonstramos o efeito fenotipico da introducao dessas subunidades mutantes diretamente no parasita, validando o metabolismo do aspartato de P. falciparum sem recorrer a abordagens geneticas complexas. Esses achados sugerem a possibilidade de validacao de outros componentes do metabolismo do aspartato plasmodial e demonstram que abordagem da PIA representa uma adicao valiosa ao painel de metodos de validacao atual.
- Imprenta:
- Data da defesa: 09.12.2019
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
BATISTA, Fernando de Assis. O ensaio de interferência de proteínas oligoméricas como método de validação de alvos antimaláricos. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-02022024-183635/. Acesso em: 02 abr. 2026. -
APA
Batista, F. de A. (2019). O ensaio de interferência de proteínas oligoméricas como método de validação de alvos antimaláricos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-02022024-183635/ -
NLM
Batista F de A. O ensaio de interferência de proteínas oligoméricas como método de validação de alvos antimaláricos [Internet]. 2019 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-02022024-183635/ -
Vancouver
Batista F de A. O ensaio de interferência de proteínas oligoméricas como método de validação de alvos antimaláricos [Internet]. 2019 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-02022024-183635/
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