Desenho e avaliação de um sistema enzimático recombinante para proteção in vitro de células epidérmicas humanas HaCaT ao estresse oxidativo (2021)
- Authors:
- Autor USP: ADRIANI, PATRICIA PEREIRA - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- DOI: 10.11606/T.87.2021.tde-20122023-140053
- Subjects: ANTIOXIDANTES; SUPERÓXIDO DISMUTASE; ENZIMAS OXIRREDUTORAS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; ESTRESSE OXIDATIVO; PEPTÍDEOS; ATIVAÇÃO ENZIMÁTICA
- Keywords: Antioxidant; Antioxidante; Cell penetrating peptides; Glutathione peroxidase; Glutationa peroxidase; Peptídeo de Penetração Celular; Superoxide dismutase; Superóxido dismutase
- Language: Português
- Abstract: Durante a vida, a pele, principal barreira de defesa do corpo, neutraliza espécies reativas de oxigênio (ERO) produzidas por processos intrínsecos e extrínsecos; porém, com a idade, a geração de ERO aumenta e o mecanismo de defesa antioxidante diminui. Dessa forma, esse desbalanço leva ao progressivo dano de estruturas celulares. O presente trabalho teve por objetivo desenhar e avaliar o efeito de um sistema molecular de transdução constituído pelas proteínas recombinantes superóxido dismutase (TrSOD) e glutationa peroxidase (TrGPx) do fungo Trichoderma reesei em células epidérmicas de queratinócitos humanos HaCaT. A utilização desse sistema, constítuido por proteínas antioxidantes, tem a finalidade de reforçar o mecanismo de defesa celular contra ERO e, também, determinar sua potencial utilização como agente de proteção celular contra o estresse oxidativo. A enzima TrGPx fusionada ao peptídeo de penetração celular (PPC) PEP-1 (PEP1-TrGPx), foi expressa em E coli BL21(DE3), caracterizada funcionalmente através de ensaios de atividade enzimática, utilizando os substratos: tioredoxina, pirogalol e peróxido de hidrogênio, e estruturalmente através de cristalografia de raio X. Além disso, teve sua capacidade de proteção antioxidante em células HaCaT avaliada por meio do método que emprega o reagente H2DCF-DA (2',7'-diclorodihidrofluoresceína diacetato), demonstrando que PEP1-TrGPx forneceu proteção antioxidante nas células HaCaT submetidas ao estresse oxidativo.As enzimas TrSOD e TrSOD fusionada aos PPC TAT e a cauda de fluorescência amarela (YFP), denominada neste trabalho como TAT-TrSODy, foram expressas em E. coli BL21e tiveram suas atividades avaliadas através do método de NBT (azul de nitrotetrazólio) em gel não-desnaturante e foi demonstrado que as proteínas foram obtidas na sua forma ativa. Também foram realizados ensaios de citotoxidade utilizando-se o método de MTT para todas as proteínas estudadas; porém, nenhuma apresentou efeitos significativos na viabilidade das células HaCaT. Os dados obtidos mostram que o sistema enzimático desenhado é promissor na proteção contra o estresse oxidativo induzido em queratinócitos humanos HaCaT. As enzimas antioxidantes do estudo apresentam potencial de uso, principalmente para a indústria de cosméticos que buscam constantemente por novas tecnologias e ativos mais eficazes. Com isso, os resultados obtidos nessa tese demonstraram-se uma abordagem promissora para o desenvolvimento de novas terapias e produtos biotecnológicos
- Imprenta:
- Data da defesa: 07.04.2021
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
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-
ABNT
ADRIANI, Patricia Pereira. Desenho e avaliação de um sistema enzimático recombinante para proteção in vitro de células epidérmicas humanas HaCaT ao estresse oxidativo. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-20122023-140053/. Acesso em: 31 mar. 2026. -
APA
Adriani, P. P. (2021). Desenho e avaliação de um sistema enzimático recombinante para proteção in vitro de células epidérmicas humanas HaCaT ao estresse oxidativo (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-20122023-140053/ -
NLM
Adriani PP. Desenho e avaliação de um sistema enzimático recombinante para proteção in vitro de células epidérmicas humanas HaCaT ao estresse oxidativo [Internet]. 2021 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-20122023-140053/ -
Vancouver
Adriani PP. Desenho e avaliação de um sistema enzimático recombinante para proteção in vitro de células epidérmicas humanas HaCaT ao estresse oxidativo [Internet]. 2021 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-20122023-140053/ - Sistema de expressão induzido por estradiol em Saccharomyces cerevisiae
- Sistema de expressão de proteína recombinante em Trichoderma reesei, induzido por estradiol
- Estudo e caracterização das enzimas Catalase e Glutationa Peroxidase de Trichoderma reesei
- Structural and functional characterization of the glutathione peroxidase-like thioredoxin peroxidase from the fungus Trichoderma reesei
- Delivery of superoxide dismutase by TAT and abalonepeptides for the protection of skin cells against oxidativestress
- Biochemical characterization of an esterase from Thermobifida fusca YX with acetyl xylan esterase activity
- Structural and functional characterization of a bifunctional GH43 α-L-arabinofuranosidase/β-xylosidase from the metagenome of Pseudacanthotermes militaris gut
- PEP-1 fused to glutathione peroxidase from Trichoderma reesei: a safe and effective antioxidant active ingredient for cutaneous applications
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