Desenvolvimento de métodos espectrométricos (UHPLC-MS/MS e MS/MS) para a determinação de peptídeos β-amilóides em amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com a doença de Alzheimer (2023)
- Authors:
- Autor USP: GRECCO, CAROLINE FERNANDES - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- DOI: 10.11606/T.59.2023.tde-30102023-174658
- Subjects: DOENÇA DE ALZHEIMER; LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO; PEPTÍDEOS
- Keywords: Aβ Peptides; Alzheimer's disease; Cerebrospinal fluid; Disposable pipette extraction; Extração em ponteiras descartáveis; Fase monolítica orgânica; In-tube SPME; Organic monolithic phase; Peptídeos Aβ; UHPLC-MS/MS
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A Doença de Alzheimer (DA) é uma demência neurodegenerativa progressiva que afeta cerca de 50 milhões de pessoas ao redor do mundo. A DA é caracterizada patologicamente pela presença de placas senis e de novelos neuro fibrilares no cérebro, causadas pelo acúmulo extracelular dos peptídeos β-amilóides (Aβ) e da proteína tau, respectivamente. O diagnóstico conclusivo da DA tem sido eminentemente clínico e, nesses casos, a neurodegeneração já se instalou no cérebro do paciente. Portanto, esforços têm sido realizados para encontrar um biomarcador molecular para a identificação de pacientes em risco de desenvolver a DA, bem como para o diagnóstico precoce e acompanhamento da progressão das neurodegenerações. Neste projeto, os métodos empregando as técnicas de microextração em fase sólida no capilar (in-tube Solid Phase Microextraction, in-tube SPME) associada à cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (Ultra High Performance Liquid Chromatography - tandem Mass Spectrometry, UHPLC-MS/MS) e a microextração em ponteiras descartáveis (Disposable Pipette Extraction, DPX) associada à MS/MS foram desenvolvidos e validados para a determinação de peptídeos Aβ em amostras líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com a DA. Durante o desenvolvimento do método in-tube SPME UHPLC-MS/MS, diferentes colunas cromatográficas e composições de fases móveis foram avaliadas. A coluna cromatográfica em fase reversa Acquity UPLC Peptide BEH C18 (150 mm × 2.1 mm e 1,7 µm) com a fase móvel constituída de (A) água + 0,3% hidróxido de amônio e (B) acetonitrila e temperatura de 35°C apresentou picos simétricos e menor tempo de análise. Uma fase monolítica orgânica com grupos sulfônicos foi sintetizada no interior do capilar de sílica fundida (6 cm × 530 µmd.i.) como fase extratora para a técnica intube SPME e caracterizada através das técnicas microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia vibracional da região do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). As condições otimizadas para a síntese da fase monolítica foram: 1- propanol (0,65 mL) e água (0,52 mL) como solventes porogênicos; 3-sulfopropil metacrilato de potássio (SPM) como monômero funcional (0,3306 g); etileno glicol dimetacrilato (EDMA) como agente reticulante (0,2 mL); 2,2'-azobisisobutironitrilo (AIBN) como iniciador radicalar (0,016 g); e polimerização por 24 horas à 60°C. As variáveis in-tube SPME (pH e volume de amostra, solvente e volume para a limpeza da fase e solvente e volume para a eluição dos analitos) foram avaliadas e otimizadas. O método in-tube SPME UHPLC-MS/MS apresentou linearidade adequada com concentrações que variaram do LIQ - 10 ng mL-1 com coeficientes de determinação (R2 ) maiores que 0,99. Os valores de exatidão (EPR) e precisão (CV) variaram de -11,7 a 14,3% e 1,0 a 18,9%, respectivamente. O método in-tube SPME UHPLC-MS/MS foi aplicado na determinação de peptídeos Aβ, em seis amostras de LCR de pacientes com a Doença de Alzheimer. O método DPX MS/MS utilizou ponteiras DPX (1 mL) contendo 60 mg de fase comercial Oasis MCX®, conectadas a uma seringa de polipropileno. A otimização das variáveis DPX (pH da amostra, tempo de equilíbrio de sorção, volume de amostra/número de ciclos e solução de eluição/número de ciclos) favoreceu a sensibilidade e seletividade do método e o emprego de pequenos volumes de amostra biológica e de solventes orgânicos. 5 µL do extrato final evaporado e reconstituído em 50 µL de fase móvel foram injetados no sistema MS/MS com a fase móvel constituída de (A) água contendo 0,3% hidróxido de amônio e (B)acetonitrila, com vazão de 0,05 mL min-1 ; e infusão direta de uma solução de metanol contendo 10% de hidróxido de amônio concentrado para favorecer a detectabilidade. O método DPX MS/MS apresentou linearidade adequada com concentrações que variaram do LIQ - 1,5 ng mL-1 com coeficientes de determinação (R2) maiores que 0,99. Os valores de exatidão (EPR) e de precisão (CV) variaram de -13,6 a 13,2 e 0,3 a 12,7%, respectivamente. Portanto, segundo os parâmetros de validação analítica avaliados, o método DPX MS/MS poderá ser empregado para a determinação de peptídeos Aβ em amostras de LCR de pacientes com DA
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2023
- Data da defesa: 01.09.2023
- Status:
- Artigo possui versão em acesso aberto em repositório (Green Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão submetida (Pré-print)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
GRECCO, Caroline Fernandes. Desenvolvimento de métodos espectrométricos (UHPLC-MS/MS e MS/MS) para a determinação de peptídeos β-amilóides em amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com a doença de Alzheimer. 2023. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2023. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-30102023-174658/. Acesso em: 31 mar. 2026. -
APA
Grecco, C. F. (2023). Desenvolvimento de métodos espectrométricos (UHPLC-MS/MS e MS/MS) para a determinação de peptídeos β-amilóides em amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com a doença de Alzheimer (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-30102023-174658/ -
NLM
Grecco CF. Desenvolvimento de métodos espectrométricos (UHPLC-MS/MS e MS/MS) para a determinação de peptídeos β-amilóides em amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com a doença de Alzheimer [Internet]. 2023 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-30102023-174658/ -
Vancouver
Grecco CF. Desenvolvimento de métodos espectrométricos (UHPLC-MS/MS e MS/MS) para a determinação de peptídeos β-amilóides em amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com a doença de Alzheimer [Internet]. 2023 ;[citado 2026 mar. 31 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-30102023-174658/ - Desenvolvimento de fase monolítica com grupos amino e nano partículas para a determinação de carbidopa, levodopa, benserazida, dopamina e 3-O-metildopa em amostras de plasma de pacientes com a doença de Parkinson por HILIC-MS/MS no modo column switching
- Aminopropyl hybrid silica monolithic capillary containing mesoporous SBA-15 particles for in-tube SPME-HILIC-MS/MS to determine levodopa, carbidopa, benserazide, dopamine, and 3-O-methyldopa in plasma samples
- Novel materials as capillary coatings for in‐tube solid‐phase microextraction for bioanalysis
- Recent development of chromatographic methods to determine parabens in breast milk samples: a review
- Recent advances in column switching high-performance liquid chromatography for bioanalysis
- In vivo solid phase microextraction for bioanalysis
- In-tube solid-phase microextraction directly coupled to mass spectrometric systems: a review
- In‐tube solid‐phase microextraction (sulfopropyl methacrylate‐co‐ethylene glycol dimethacrylate monolithic capillary) coupled to LC–MS/MS to determine beta amyloid peptides in Alzheimer s cerebrospinal fluid samples
- Determination of parabens in breast milk samples by dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) and ultra-high-perfomance liquid chromatography tandem mass spectrometry
Informações sobre a disponibilidade de versões do artigo em acesso aberto coletadas automaticamente via oaDOI API (Unpaywall).
Por se tratar de integração com serviço externo, podem existir diferentes versões do trabalho (como preprints ou postprints), que podem diferir da versão publicada.
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
