Purificação e caracterização de peptídeos presentes nos venenos de serpentes africanas: à procura de inibidores de peptidases de importância médica (2019)
- Authors:
- Autor USP: KODAMA, ROBERTO TADASHI - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- Subjects: BIOTECNOLOGIA; ENZIMAS HIDROLÍTICAS; INIBIDORES DE ENZIMAS; SERPENTES; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; TOXINAS EM ANIMAL; PEPTÍDEOS; ENZIMAS PROTEOLÍTICAS; ANGIOTENSINAS
- Keywords: Angiotensin I Converting Enzyme; Catepsina L; Cathepsin L; Elastase-1; Elastase-1; Enzima conversora de angiotensina I; Inibidores de peptidases; Peptidase inhibitors; Snake venom; Veneno de serpentes
- Language: Português
- Abstract: As peptidases desempenham um papel importante para o bom funcionamento fisiológico dos mais diversos organismos. Quando desreguladas, estão associadas a patologias, por exemplo, a atividade exacerbada da elastase-1 está relacionada à pancreatite, e, da catepsina L, está envolvida na metástase de tumores. Portanto estas peptidases se tornaram potenciais alvos terapêuticos, no que se refere à procura por inibidores. O veneno de serpentes é composto por misturas complexas de moléculas que podem apresentar as mais derivadas funções, inclusive a inibição de enzimas. Tendo isto em vista, este trabalho teve como objetivo, purificar, caracterizar e estudar in vitro e in silico novos inibidores presentes nas porções de baixa massa molecular dos venenos de três gêneros de serpentes africanas, Naja, Dendroaspis e Bitis. Para isso, as porções de baixa massa molecular (10 kDa) de cada veneno foram submetidas a uma cromatografia por RP-HPLC usando uma coluna C18. As frações foramcoletadas e um screening substratos FRET, foi feito para verificação da inibição sobre as peptidases estudadas nesse trabalho. A identificação das frações de interesse foi realizada por espectrometria de massas, dentre as sequências obtidas, moléculas da classe das three-finger-toxins foram identificadas, e, pela primeira vez descritas como inibidores de peptidases. Outras moléculas, da classe dos Kunitz, que foram anteriormente descritas como bloqueadores de canais Na+ e K+ , também foram identificadas. O peptídeo DPSA8 (do veneno de Dendroaspis polylepis) se destacou por apresntar inibição semelhante da catepsina L e da elastase-1 no teste de screening. Este peptídeo, classificado como Kunitz, foi caracterizado como um inibidor acompetirivo para a elastase-1, com um Kι de 8μM.A elastase-1, dentre estes modelos foram mostradas interações no sítio catalítico e em outras regiões da enzima. Utilizando estes modelos de interação, dois peptideos foram desenhados para serem estudados quanto à possivel inibição da elastase-1 e da catepsina L. O primeironão apresentou atividade inibitória, entretanto, o segundo, um peptídeo nomeado PEP2 (contendo 30 resapiduos de aminoacido), mostrou ser um inibidor competitivo , com Kι μM sobre a catepsina L. Além disso, foi realizada de ancoramento dos BPPs, do veneno de Bitis spp, usando a ECA (enzima conversora de angiotensina I) como receptor. Estes resultados mostraram uma alta relação dos scores obtidos in silico com os Kis otidos e já Publicados. Este trabalho descreve algumas toxinas de baixa massa molecular com a função inibitória de peptidases, isso pode contribuir para um entendimento maior do processo de envenenamento. Em adição, foi empregado o método de ancoramento molecular para o desenho de novas moléculas, resultando no PEP2, um peptídeo capaz de inibir a atividade da catepsina L com baixa constante de inibição. Mostrando mais uma vez que esta metodologia pode contribuir para a procura de novas entidades biotecnológicas.
- Imprenta:
- Data da defesa: 22.10.2019
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ABNT
KODAMA, Roberto Tadashi. Purificação e caracterização de peptídeos presentes nos venenos de serpentes africanas: à procura de inibidores de peptidases de importância médica. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29092023-104830/. Acesso em: 03 jan. 2026. -
APA
Kodama, R. T. (2019). Purificação e caracterização de peptídeos presentes nos venenos de serpentes africanas: à procura de inibidores de peptidases de importância médica (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29092023-104830/ -
NLM
Kodama RT. Purificação e caracterização de peptídeos presentes nos venenos de serpentes africanas: à procura de inibidores de peptidases de importância médica [Internet]. 2019 ;[citado 2026 jan. 03 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29092023-104830/ -
Vancouver
Kodama RT. Purificação e caracterização de peptídeos presentes nos venenos de serpentes africanas: à procura de inibidores de peptidases de importância médica [Internet]. 2019 ;[citado 2026 jan. 03 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29092023-104830/
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