Nanopartículas formadas por proteínas recombinantes modulares como plataformas de gene delivery e combate às células tumorais (2023)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, FERNANDA SANTOS DE - EP
- Unidade: EP
- Sigla do Departamento: PQI
- Subjects: NANOPARTÍCULAS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Terapias avançadas, como a terapia gênica, têm sido amplamente estudadas para o tratamento do câncer. Muitos destes estudos baseiam-se no uso de vetores virais para a entrega de ácidos nucléicos para as células alvo. No entanto, ainda existem problemas recorrentes nesses estudos, tais como; 1) a dificuldade da entrega gênica para células tumorais devido à presença de barreiras físicas, enzimáticas e difusionais; 2) a estimulação de resposta inflamatória pelo sistema imune devido ao uso de vetores virais e; 3) os custos elevados para produção destes vetores. Uma alternativa para a superação destes obstáculos é o uso de proteínas recombinantes especificamente desenhadas para entrega gênica e combate às células tumorais. São, em geral, proteínas modulares, multifuncionais e capazes de mimetizar a habilidade dos vírus de explorar as sinalizações e respostas extra- e intracelulares para infectar as células. Dessa forma, o principal objetivo deste mestrado foi o desenvolvimento e caracterização de proteínas recombinantes multifuncionais capazes de realizarem eficientemente o transporte de material genético (RNA de interferência) para o interior de células tumorais. Para isso, a proteína repórter GFP foi fusionada a uma desintegrina (Echistatina) servindo como domínio de direcionamento para células tumorais. A proteína também contém uma poliarginina (R6) que interage e condensa o material genético a ser entregue. Quatro diferentes construções gênicas foram sintetizadas e expressas em Escherichia coli: construção 1 completa (H6-R6-GFP-ECH); construção 2 - sem Echistatina (H6-R6-GFP); construção 3 - sem a sequência R6 (H6-GFP-ECH); e construção 4 - (H6-R9-GFP-ECH), contendo a sequência R9 com potencial de induzir a formação de nanopartículas. As proteínas foram produzidas em E. coli e purificadas por cromatografia deafinidade, sem obstáculos quanto à toxicidade para a bactéria. A fluorescência das diferentes construções foi analisada e comparada. O comportamento hidrodinâmico das proteínas em solução foi também avaliado por DLS, com e sem a presença de pDNA, verificando-se assim interação com ácido nucléico e formação de nanopartículas. Estudos de atividade biológica em células in vitro indicam que a construção 1 foi capaz de direcionar e facilitar a entrada de siRNAs nas células que superexpressam receptores integrinas (células U87MG). Nos ensaios de citotoxicidade também foi demonstrado o potencial da própria proteína que, por si só, foi capaz de diminuir a viabilidade das células que super expressam integrinas, sendo ela própria um potencial agente antitumoral.
- Imprenta:
- Data da defesa: 10.03.2023
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ABNT
OLIVEIRA, Fernanda Santos de. Nanopartículas formadas por proteínas recombinantes modulares como plataformas de gene delivery e combate às células tumorais. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-17072023-151603/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Oliveira, F. S. de. (2023). Nanopartículas formadas por proteínas recombinantes modulares como plataformas de gene delivery e combate às células tumorais (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-17072023-151603/ -
NLM
Oliveira FS de. Nanopartículas formadas por proteínas recombinantes modulares como plataformas de gene delivery e combate às células tumorais [Internet]. 2023 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-17072023-151603/ -
Vancouver
Oliveira FS de. Nanopartículas formadas por proteínas recombinantes modulares como plataformas de gene delivery e combate às células tumorais [Internet]. 2023 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-17072023-151603/
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