Efeito da MAPK8 sobre o estresse oxidativo e a esteroidogênese em células adrenocorticais com atividade reduzida de NNT (2023)
- Authors:
- Autor USP: GEBENLIAN, JULIANA LOURENÇO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RPP
- DOI: 10.11606/D.17.2023.tde-11042023-093149
- Subjects: ESTRESSE OXIDATIVO; CÓRTEX ADRENAL; ANTIOXIDANTES; LINHAGEM CELULAR
- Keywords: Adrenal steroidogeneses; EROs; Esteroidogênese adrenal; Gene MAPK8; Gene NNT; MAPK8 gene; NNT gene; Oxidative stress; ROS
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Introdução: Novos estudos sobre a fisiopatologia adrenal revelaram que a proteína nicotinamida nucleotídeo transidrogenase (NNT) é essencial para os mecanismos de defesa antioxidante do córtex adrenal. Mutações deletérias no gene NNT têm sido associadas à deficiência familiar de glicocorticoides (DFG), uma forma hereditária de insuficiência adrenal primária. Modificações no estado redox celular, como observado na deficiência de NNT, levam ao aumento da proteína quinase 8 ativada por mitógeno (MAPK8). Objetivo: Analisar os efeitos do crosstalk entre NNT e MAPK8 na linhagem celular de carcinoma adrenocortical H295R (H295R). Verificar se o aumento da MAPK8 compensa o aumento da formação das espécies reativas de oxigênio (EROs) e a redução da produção de cortisol resultantes da deficiência de NNT nas células H295R. Métodos: O gene NNT nas células H295R foi silecido por meio de siRNA. O efeito da deficiência de NNT na expressão da MAPK8 nessas células foi avaliado por meio de qPCR), Western blot (WB) e imunofluorescência. Em situação basal e após estímulo com 10uM de forskolina (FSK), a produção intracelular de espécies reativas de oxigênio (EROs) pelas células NNT nontarget (NT) ou deficientes em NNT (siNNT) foi mensurada utilizando o marcador mitocondrial DCFDA/H2DCDFDA. A viabilidade celular foi avaliada utilizando citometria de fluxo (BD-FACS). A esteroidogêneses adrenal foi avaliada pela dosagem de cortisol do meio celular por radioimunoensaio (RIE). Resultados: O silenciamento do gene NNT reduziu seus níveis de RNAm e proteína em 78% (p<0,0001) e 50% (p=0,001), respectivamente, sem comprometer a viabilidade das células H295R. Após o silenciamento de NNT houve aumento significativo da expressão gênica (p=0,01) e proteica da MAPK8 assim como diminuição da secreção de cortisol (p=0,004). Nãoocorreram alterações na produção de EROs intracelular dessas células. Quando estas células deficientes de NNT foram submetidas ao estímulo pela FSK, observouse o aumento significativo na expressão gênica (p=0,03) e proteica da MAPK8 porém houve diminuição da secreção de cortisol (p=0,01). Novamente não houve alteração na produção de EROs intracelular. Conclusão: As células H295R deficientes em NNT são capazes de manter a homeostase mitocondrial mas apresentam prejuízo na secreção de cortisol em situação basal. A ativação da via da MAPK8 parece ser um potencial mecanismo de compensação nesse processo. Em situação de estresse, as células H295R deficientes para NNT parecem preservar o equilíbrio redox em detrimento da esteroidogênese
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2023
- Data da defesa: 23.01.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
GEBENLIAN, Juliana Lourenço. Efeito da MAPK8 sobre o estresse oxidativo e a esteroidogênese em células adrenocorticais com atividade reduzida de NNT. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17144/tde-11042023-093149/. Acesso em: 04 jan. 2026. -
APA
Gebenlian, J. L. (2023). Efeito da MAPK8 sobre o estresse oxidativo e a esteroidogênese em células adrenocorticais com atividade reduzida de NNT (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17144/tde-11042023-093149/ -
NLM
Gebenlian JL. Efeito da MAPK8 sobre o estresse oxidativo e a esteroidogênese em células adrenocorticais com atividade reduzida de NNT [Internet]. 2023 ;[citado 2026 jan. 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17144/tde-11042023-093149/ -
Vancouver
Gebenlian JL. Efeito da MAPK8 sobre o estresse oxidativo e a esteroidogênese em células adrenocorticais com atividade reduzida de NNT [Internet]. 2023 ;[citado 2026 jan. 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17144/tde-11042023-093149/ - Avaliação do estresse oxidativo e a ativação da via MAPK8 em células esteroidogênicas após redução da atividade de NNT
- Nicotinamide nucleotide transhydrogenase is essential for adrenal steroidogenesis: clinical and in vitro lessons
- Metabarcoding approach to identify bacterial community profiling related to nosocomial infection and bacterial trafficking-routes in hospital environments
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.17.2023.tde-11042023-093149 (Fonte: oaDOI API)
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