Mapping transcriptional regulation of biofilm-related genes promoters in Pseudomonas aeruginosa (2022)
- Authors:
- Autor USP: PEREIRA, GREICY KELLY BONIFACIO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- DOI: 10.11606/T.17.2022.tde-03022023-101053
- Subjects: PSEUDOMONAS; BIOFILMES; REGULAÇÃO GÊNICA; FATORES DE TRANSCRIÇÃO
- Keywords: Biofilm; Fatores de transcrição; Gene regulation; Pseudomonas aeruginosa; Transcription factors
- Agências de fomento:
- Language: Inglês
- Abstract: Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa predominante no solo, vegetação e água. Por ser um patógeno oportunista que acomete pessoas imunossuprimidas, P. aeruginosa tem grande importância clínica. É bastante resistente a antimicrobianos e possui diversos fatores de virulência que contribuem para sua patogenicidade. Um importante fator de virulência bacteriana é a formação de biofilmes que são agregados de microrganismos incorporados a uma matriz extracelular que protege as bactérias de ambientes hostis. A formação de biofilme é um processo precisamente regulado a nível transcricional. A maior parte dessa regulação é realizada diretamente por fatores de transcrição que modulam a atividade de promotores envolvidos na expressão de fatores de virulência. Nesse sentido, objetivamos caracterizar o comportamento de diferentes promotores de genes envolvidos na regulação de biofilme de P. aeruginosa sob diferentes condições e buscar possíveis novas proteínas de ligação ao DNA associadas às suas regiões promotoras. Para isso, as regiões upstream dos genes gacA, gacS, ladS, retS, rsmA, rsmZ e PA1611 foram clonadas separadamente em um vetor repórter miniTn7 e inseridas no cromossomo de PAO1. Em seguida, avaliamos o crescimento e a atividade da região upstream pela expressão de lux em diferentes fontes de carbono e privação de ferro. Não observamos diferenças na atividade das regiões upstream sob crescimento com glicose e glicerol. No entanto, na presença de citrato, a região upstream de retS apresentou menor atividade, enquanto a atividade da região upstream de rsmA foi induzida. No ensaio de cromatografia de afinidade ao DNA para as regiões upstream de retS e rsmA em meio LB, encontramos pqsC e pqsH ligando-se à região upstream de retS e o regulador negativo mvaT ligando-se à região upstream de rsmA. Em nossos achados, mvaT tem influêncianegativa na regulação de rsmA, uma vez que sua inativação leva a uma maior atividade da região upstream de rsmA. pqsC e pqsH estão envolvidos no quórum sensing e na formação de biofilme. Em nosso estudo, hipotetizamos que ambos têm um papel na ativação da região upstream de retS em meio LB e em MOPSglicose, uma vez que sua mutação resultou em uma maior atividade dessa região. Por outro lado, o oposto parece acontecer quando a fonte de carbono é acetato e succinato. Também avaliamos por Western Blot a expressão de retS ao longo do tempo quando co-cultivado com Staphylococcus aureus e Candida albicans em meio artificial de escarro e notamos que não houve alteração na expressão deste gene quando comparado ao cultivo isolado de PAO1
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 03.11.2022
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo NÃO é de acesso aberto
-
ABNT
PEREIRA, Greicy Kelly Bonifacio. Mapping transcriptional regulation of biofilm-related genes promoters in Pseudomonas aeruginosa. 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-03022023-101053/. Acesso em: 26 jan. 2026. -
APA
Pereira, G. K. B. (2022). Mapping transcriptional regulation of biofilm-related genes promoters in Pseudomonas aeruginosa (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-03022023-101053/ -
NLM
Pereira GKB. Mapping transcriptional regulation of biofilm-related genes promoters in Pseudomonas aeruginosa [Internet]. 2022 ;[citado 2026 jan. 26 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-03022023-101053/ -
Vancouver
Pereira GKB. Mapping transcriptional regulation of biofilm-related genes promoters in Pseudomonas aeruginosa [Internet]. 2022 ;[citado 2026 jan. 26 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-03022023-101053/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.17.2022.tde-03022023-101053 (Fonte: oaDOI API)
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