Silenciamento gênico de Diatraea saccharalis utilizando a técnica de RNA de interferência (RNAi) (2022)
- Authors:
- Autor USP: FACTOR, BRUNA GARBATTI - ESALQ
- Unidade: ESALQ
- Sigla do Departamento: LGN
- DOI: 10.11606/T.11.2022.tde-13022023-101833
- Subjects: RNA DE TRANSFERÊNCIA; BACTÉRIAS; BROCAS (INSETOS NOCIVOS)
- Keywords: Insetos-praga; Silenciamento pós-transcricional
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O uso da técnica de RNAi vem sendo apontado como uma estratégia inovadora que pode ser integrada no manejo de importantes pragas agrícolas. Diatreaea saccharalis é considerada uma das principais pragas da cana-de-açúcar. Os danos econômicos gerados à cultura são bastante consideráveis. A cada safra, R$ 5 bilhões são perdidos no Brasil em decorrência do ataque desta praga. A junção destes fatores implica, portanto, numa demanda por outros métodos de controle. O silenciamento gênico por RNAi surge como potencial de uso para o controle de D. saccharalis. Logo, o objetivo do trabalho foi avaliar o transcriptoma de D. saccharalis e identificar os relacionados a maquinaria de RNAi nesta espécie, bem como potenciais genes alvos para silenciamento gênico. Além disso, avaliar o silenciamento de genes de D. saccharalis, utilizando o método de entrega de dsRNA via bactéria E. coli HT115 (DE3), disponibilizada em dieta artificial. Ainda, buscou-se realizar a identificação, caracterização e knockdown do gene relacionado a uma proteína de degradação de dsRNA em insetos, principalmente lepidópteros, a REase de D. saccharalis, objetivando maior acúmulo de dsRNA e melhor eficiência RNAi no inseto. Também, estudou-se a criação de um método de entrega de dsRNA para lagartas de D. saccharalis, via bactérias endofíticas Pantoea agglomerans 33.1. Para isto, foi necessário realizar primeiramente o knockout do gene rnc do microrganismo, e posterior transformação para expressão de dsRNA. No geral,foram encontrados contigs homólogos de todos os componentes da rota de RNAi. Além disso, genes envolvidos em rotas de hormônios, resistência a inseticidas e ao trato digestório do inseto foram identificados como candidatos ao silenciamento gênico via RNAi. A partir da avaliação dos parâmetros biológicos (duração da fase larval, mortalidade larval e peso de pupas), pudemos demonstrar com a entrega de dsRNA contra genes alvos específicos do inseto, expressos em bactérias E. coli HT115 (DE3), a ausência de evidências de efeitos de silenciamento gênico, presumindo-se que, tal como ocorre na maioria dos insetos da ordem Lepidoptera, D. saccharalis apresenta recalcitrância aos mecanismos de RNAi. Além disso, a identificação e o knockdown do gene Ds_up56, que codifica REase em D. saccharalis, reduziu em 3,5 vezes o acúmulo de transcritos de CHI demonstrando a contribuição deste gene para a degradação de transcritos do gene alvo e aumentando a eficiência RNAi, justificando a recalcitrância de D. saccharalis ao RNAi. Por fim, com o knockout do gene rnc de P. agglomerans 33.1 e com a transformação deste microrganismo com vetor de silenciamento pdag para expressar dsRNA contra um gene específico de D. saccharalis, demostramos a ocorrência de acúmulo de dsRNA no hospedeiro bacteriano, propondo a utilização de P. agglomerans 33.1Δrnc como vetor de entrega RNAi para o controle de insetos-praga, demonstrando ser uma alternativa potencial para a proteção de culturas agronômicasrelevantes
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2022
- Data da defesa: 05.12.2022
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
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ABNT
FACTOR, Bruna Garbatti. Silenciamento gênico de Diatraea saccharalis utilizando a técnica de RNA de interferência (RNAi). 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2022. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-13022023-101833/. Acesso em: 08 abr. 2026. -
APA
Factor, B. G. (2022). Silenciamento gênico de Diatraea saccharalis utilizando a técnica de RNA de interferência (RNAi) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-13022023-101833/ -
NLM
Factor BG. Silenciamento gênico de Diatraea saccharalis utilizando a técnica de RNA de interferência (RNAi) [Internet]. 2022 ;[citado 2026 abr. 08 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-13022023-101833/ -
Vancouver
Factor BG. Silenciamento gênico de Diatraea saccharalis utilizando a técnica de RNA de interferência (RNAi) [Internet]. 2022 ;[citado 2026 abr. 08 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-13022023-101833/
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