Caracterização celular e molecular da actina de tripanossomatídeos (2017)
- Authors:
- Autor USP: PRADO, LIGIA CAROLINA DA SILVA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: TRYPANOSOMATIDAE; ACTINAS; PROTEÍNAS
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A actina é uma proteína monomérica globular (actina-G) onipresente em células eucarióticas, envolvida em processos celulares como citocinese, motilidade e endocitose. Ao contrário da maioria das células eucarióticas, os membros da família Trypanosomatidae não apresentam a actina como filamentos transcelulares, mas apenas na forma monomérica ou em curtos filamentos, não constituindo o citoesqueleto desses parasitos, que é formado predominantemente por microtúbulos subpeliculares. Diferenças na sequência de aminoácidos da actina de tripanossomatídeos, nos sítios de interação monômero-monômero ou proteínas acessórias parece ser o fator responsável pela não ocorrência de filamentos transcelulares. Apesar das suas peculiaridades, a proteína é constitutivamente expressa em todos os tripanossomatídeos. Esta tese foca na caracterização das propriedades bioquímicas e celulares da actina de tripanossomatídeos. A partir de uma biblioteca genômica de Leishmania major produzimos ferramentas para essa caracterização: uma actina recombinante fusionada a GST (LmActina) que foi usada em ensaios de interação proteína-proteína (pull-down), a partir do qual proteínas de interação com a actina foram identificadas. A partir da LmActina, ainda produzimos, um anticorpo policlonal que reconheceu tanto as proteínas recombinantes, como a actina endógena dos parasitos, com o qual efetuamos estudos sobre a distribuição subcelular da actina por ensaios de Western blotting, imunofluorescência e microscopia eletrônica. Ainda, identificamos 12 proteínas que interagiram com a actina in vitro, que são, em maioria envolvidas com transdução de sinais, processos metabólicos e nucleares. Uma linhagem de Trypanosoma brucei expressando a actina constitutivamente fusionada à cauda Myc (TbActina) também foi gerada. Nós confirmamos a presença da actina na fração solúvel dos parasitos, não associada ao citoesqueleto e distribuída portodo o corpo celular, presente no bolso flagelar, flagelo, cinetoplastos. Revelamos, pela primeira vez, a presença da actina no núcleo de tripanossomatídeos T. brucei e T. cruzi e, assim como descrito para actina de células de mamíferos, esta retenção nesse compartimento pode estar envolvida com modificações pós-traducionais (SUMOilação). Sugerimos nesse trabalho que a actina de tripanossomatídeos poderia estar envolvida com processos nucleares, já que confirmamos a sua presença nesse compartimento celular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2017
- Data da defesa: 08.12.2017
-
ABNT
PRADO, Ligia Carolina da Silva. Caracterização celular e molecular da actina de tripanossomatídeos. 2017. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. . Acesso em: 03 maio 2025. -
APA
Prado, L. C. da S. (2017). Caracterização celular e molecular da actina de tripanossomatídeos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Prado LC da S. Caracterização celular e molecular da actina de tripanossomatídeos. 2017 ;[citado 2025 maio 03 ] -
Vancouver
Prado LC da S. Caracterização celular e molecular da actina de tripanossomatídeos. 2017 ;[citado 2025 maio 03 ]
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
