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Tese

Culturas de fatias de cérebro humano adulto: um novo modelo para o estudo de doenças cerebrais (2019)

  • Authors:
  • Autor USP: MENDES, NIELE DIAS - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RPA
  • Subjects: DOENÇA DE ALZHEIMER; ESQUIZOFRENIA; EPILEPSIA
  • Language: Português
  • Abstract: JUSTIFICATIVA: As culturas de fatias de cérebro humano adulto representam um importante modelo para estudos de doenças que afetam o sistema nervoso central humano adulto. A obtenção do material para esse tipo de cultura não é prejudicial ao paciente, uma vez que são utilizados pequenos fragmentos de córtex que são descartados durante os procedimentos cirúrgicos. OBJETIVO: Preparar culturas de fatias de cérebro humano adulto a partir de tecido cortical proveniente de pacientes com Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) submetidos ao tratamento cirúrgico, e utilizar essas culturas como modelo de estudo para doenças do cérebro humano adulto, como a Doença de Alzheimer e a Esquizofrenia, dentre outras. MATERIAIS E MÉTODOS: Fragmentos de 1 cm³ de córtex temporal foram obtidos de 44 pacientes adultos com ELT resistente ao tratamento clinico e submetidos à lobectomia temporal parcial com amigdalo-hipocampectomia. Imediatamente após a remoção, os fragmentos de lobo temporal foram imediatamente imersos em solução salina tamponada gelada e oxigenada artificialmente. Os tecidos foram fatiados em vibrátomo a 200 μm e cultivados free-floating por até 9 dias em meio apropriado. A integridade tecidual foi avaliada por coloração de H&E e a morfologia dos tipos celulares foi avaliada por imuno-histoquímica para neurônios, astrócitos, micróglia respectivamente. A função neuronal foi avaliada pela análise dos níveis de ERK fosforilada e através da dosagem de neurotransmissores após despolarização com KCl, sendo que a função mitocondrial foi inferida pelo consumo de oxigênio da cadeia respiratória. Por fim, foram realizados experimentos para avaliar a resposta das fatias em cultura a estímulos ligados a patogênese da Doença de Alzheimer (desafio com oligômeros do peptídeo β amiloide) e da Esquizofrenia (hipofunção de receptor de glutamato do tipo NMDA induzida pela MK 801). RESULTADOS: A viabilidade celular nas fatias não foisignificativamente alterada até o nono dia de cultura. Análises histológicas demonstraram que o tecido manteve-se com a citoarquitetura preservada ao longo dos dias em cultura, com a presença de neurônios, micróglia e astrócitos, que se mantiveram a estímulos como despolarização química (por KCI), uso de ligante de NMDA e a estímulos pró-inflamatórios, como o tratamento com LPS. A respiração mitocondrial permaneceu eficiente até pelo menos o quarto dia em cultura. Detectamos ligação robusta de oligômeros de Aβ às fatias em cultura, assim como uma reduzida resposta ao estímulo com NMDA após tratamento prévio com MK 801. CONCLUSÃO: As culturas de fatias de córtex humano adulto mantiveram-se funcionais até 9 dias em cultura e são, portanto, passíveis de serem utilizadas como modelo para estudos de mecanismos associados a doenças degenerativas do cérebro humano
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 02.12.2019
    • How to cite
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    • ABNT

      MENDES, Niele Dias. Culturas de fatias de cérebro humano adulto: um novo modelo para o estudo de doenças cerebrais. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. . Acesso em: 04 out. 2024.

    • APA

      Mendes, N. D. (2019). Culturas de fatias de cérebro humano adulto: um novo modelo para o estudo de doenças cerebrais (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Mendes ND. Culturas de fatias de cérebro humano adulto: um novo modelo para o estudo de doenças cerebrais. 2019 ;[citado 2024 out. 04 ]

    • Vancouver

      Mendes ND. Culturas de fatias de cérebro humano adulto: um novo modelo para o estudo de doenças cerebrais. 2019 ;[citado 2024 out. 04 ]

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