Tese

Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2 (2018)

• Authors:
  • Barreto, Matheus Quintana
  • Ward, Richard John (Orientador)
• Autor USP: BARRETO, MATHEUS QUINTANA - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RBI
• Subjects: BIOCOMBUSTÍVEIS; ETANOL; SACCHAROMYCES; BIOQUÍMICA; CRISTALOGRAFIA DE RAIOS X
• Agências de fomento:
  • Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
  • Financiamento CNPq
• Language: Português
• Abstract: A xilose-isomerase (XI) de Piromyces sp. E2 é uma enzima que converte D-xilose a D-xilulose sem a necessidade de cofatores redutores e que tem sido extensivamente utilizada para engenheirar Saccharomyces cerevisiae a fim de promover a produção de etanol a partir desta pentose. A eficiência catalítica da xilose isomerase é baixa, e esforços para melhorar o desempenho da enzima oferece benefícios para a engenharia metabólica de S. cerevisiae. A permutação circular é uma técnica de engenharia de proteínas que visa à ligação das extremidades de uma cadeia polipeptídica e abertura de novas em pontos distintos da sequência na busca de mudanças em uma característica que se deseja melhorar. Este trabalho objetivou realizar a permutação circular da XI de Piromyces sp. E2 a fim de buscar por variantes de enzimas cataliticamente mais eficientes. Desta forma a XI tipo selvagem foi modificada por uma sequência linker de 18 aminoácidos adicionada à extremidade amino-terminal. A XI modificada (denominada XI linker) foi submetida à caracterização biofísica e bioquímica. Os resultados indicam que a XI linker possui estrutura idêntica à de sua parental, organizando-se como um barril (aB)8 em forma de tetrâmero, sendo que o linker apresenta estrutura desordenada. Parâmetros cinéticos indicam que ela possui atividade ótima em pH 7.5 e 65o.C, com eficiência catalítica cerca de 7,5 vezes maior nesta condição do que a 30o.C, e que a XI com linker parece ser sintetizada em maiores níveis em E. coli. Com base nesses dados estamos otimizando as etapas para realizar a permutação circular da enzima e realizando tentativas de averiguar sua estrutura tridimensional por cristalografia de raios-x
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2018
• Data da defesa: 02.03.2018

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How to cite

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• ABNT

  BARRETO, Matheus Quintana. Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. . Acesso em: 02 out. 2024.

• APA

  Barreto, M. Q. (2018). Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Barreto MQ. Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2. 2018 ;[citado 2024 out. 02 ]

• Vancouver

  Barreto MQ. Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2. 2018 ;[citado 2024 out. 02 ]

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