Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2 (2018)
- Authors:
- Autor USP: BARRETO, MATHEUS QUINTANA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: BIOCOMBUSTÍVEIS; ETANOL; SACCHAROMYCES; BIOQUÍMICA; CRISTALOGRAFIA DE RAIOS X
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A xilose-isomerase (XI) de Piromyces sp. E2 é uma enzima que converte D-xilose a D-xilulose sem a necessidade de cofatores redutores e que tem sido extensivamente utilizada para engenheirar Saccharomyces cerevisiae a fim de promover a produção de etanol a partir desta pentose. A eficiência catalítica da xilose isomerase é baixa, e esforços para melhorar o desempenho da enzima oferece benefícios para a engenharia metabólica de S. cerevisiae. A permutação circular é uma técnica de engenharia de proteínas que visa à ligação das extremidades de uma cadeia polipeptídica e abertura de novas em pontos distintos da sequência na busca de mudanças em uma característica que se deseja melhorar. Este trabalho objetivou realizar a permutação circular da XI de Piromyces sp. E2 a fim de buscar por variantes de enzimas cataliticamente mais eficientes. Desta forma a XI tipo selvagem foi modificada por uma sequência linker de 18 aminoácidos adicionada à extremidade amino-terminal. A XI modificada (denominada XI linker) foi submetida à caracterização biofísica e bioquímica. Os resultados indicam que a XI linker possui estrutura idêntica à de sua parental, organizando-se como um barril (aB)8 em forma de tetrâmero, sendo que o linker apresenta estrutura desordenada. Parâmetros cinéticos indicam que ela possui atividade ótima em pH 7.5 e 65o.C, com eficiência catalítica cerca de 7,5 vezes maior nesta condição do que a 30o.C, e que a XI com linker parece ser sintetizada em maiores níveis em E. coli. Com base nesses dados estamos otimizando as etapas para realizar a permutação circular da enzima e realizando tentativas de averiguar sua estrutura tridimensional por cristalografia de raios-x
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 02.03.2018
-
ABNT
BARRETO, Matheus Quintana. Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. . Acesso em: 30 dez. 2025. -
APA
Barreto, M. Q. (2018). Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Barreto MQ. Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2. 2018 ;[citado 2025 dez. 30 ] -
Vancouver
Barreto MQ. Expression, characterization and egineering of Xylose-Isomerase from Piromyces sp. E2. 2018 ;[citado 2025 dez. 30 ] - Estudos funcionais e estruturais da xilose isomerase de Piromyces sp. E2
- Co-immobilization of multiple enzymes on ferromagnetic nanoparticles for the depolymerization of xyloglucan
- Protein engineering strategies to expand CRISPR-Cas9 applications
- Selective xyloglucan oligosaccharide hydrolysis by a GH31 α-xylosidase from Escherichia coli
- Xylose isomerase from Piromyces sp. E2 is a promiscuous enzyme with epimerase activity
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