Avaliação de painel gênico expandido baseado em sequenciamento de nova geração aplicado à análise de correlações genótipo-fenótipo em neoplasia endócrina múltipla do tipo 1 (2022)
- Authors:
- Autor USP: CARVALHO, RAFAEL ARRABAÇA DE - FM
- Unidade: FM
- DOI: 10.11606/T.5.2022.tde-19012023-121121
- Subjects: DOENÇAS RARAS; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Doenças raras; Genetic diagnosis; Genetic sequencing; Multiple endocrine neoplasia type 1; Next generation sequencing; Rare diseases; Sequenciamento genético
- Language: Português
- Abstract: A neoplasia endócrina múltipla tipo 1 (MEN1) é uma síndrome genética de herança autossômica dominante que predispõe ao risco aumentado de desenvolvimento de diversos tumores endócrinos e não endócrinos. É causada, principalmente, por mutação germinativa no gene MEN1 (11q13). Outros genes (CDKN2B/p15, CDKN2C/p18 CDKN1A/p21, CDKN1B/p27Kip1 e AIP) foram, posteriormente, relacionados ao fenótipo MEN1 em menos de 5% dos casos negativos para mutação germinativa MEN1. Pacientes com mutação nestes genes ou sem nenhuma mutação germinativa documentada são conhecidos como indivíduos MEN1(-). Nosso grupo de pesquisa padronizou e validou recentemente um mini painel genético baseado em sequenciamento paralelo em larga escala (NGS, Next Generation Sequencing) desenhado a partir de PCR longa (long range PCR) que proporcionou o sequenciamento completo (exons, fronteira intron-exon, regiões intrônicas profundas e região promotora) de todos estes genes simultaneamente (MEN1, CDKN2B/p15, CDKN2C/p18 CDKN1A/p21, CDKN1B/p27Kip1 e AIP). Estudos controversos e divergentes não têm sido capazes de documentar correlações entre casos com mutações no gene MEN1 (genótipo) e seu fenótipo. Mais recentemente, vem sendo mais bem delineada uma outra forma de análise de correlação genótipo-fenótipo em MEN1 caracterizada pelas diferenças clínicas e de evolução entre casos com e sem mutação germinativa MEN1. Tem sido demonstrado que indivíduos MEN1(-) tem peculiaridades fenotípicas e evoluções diferentes baseadoem estudos com casuísticas limitadas e que não foram plenamente estudadas geneticamente. Neste estudo nós investigamos correlações genótipo-fenótipo em casos-índices clinicamente diagnosticados com MEN1 usando este mini painel de 6 genes baseado em PCR long range. A casuística foi constituída por 143 casos-índices com MEN1, sendo 87 deles portadores de mutação germinativa MEN1 e 56 casos-índices sem mutação germinativa MEN1, detectada por sequenciamento (Sanger/NGS) ou por MLPA (MEN1, CDKN1B/p27Kip1 e AIP). Destes 56 casos-índices, 40 deles eram também negativos para o mini painel NGS. Ao todo, 34 de 48 caraterísticas clínicas avaliadas eram diferentes (p45a/PIT >30a (30x), acromegalia (18x), HPT/PIT (18x), HPT>45a (16x), MEN1>45a (13x), e PIT>30a (4x). Além disso, durante o seguimento de 10,262±0,79 anos (SE) (8,85-11,67 anos), nenhum caso MEN1(-) foi diagnosticado com um 3o tumor relacionado à MEN1 (0/39 vs. 18/47, 38%; p< 0,0001) ou evoluíram com tumores malignos. De fato, dp-NET foi o 3o tumor mais frequente (12/19; 63,1%) em pacientes com mutação MEN1, seguido de PIT (6/19, 31,6%) e HPT (1/19; 5,3%). A sobrevida relacionada a doença era menor em casos com mutação (p=0,025) uma vez que foram associados com uma taxa mais elevada de mortalidade relacionada à MEN1 (1/56, 1,8% vs. 12/87, 16%; p< 0,0001). Corroborando com isso, nove pacientes foram diagnosticados (7) ou progrediram com dp-NET maligno (2) sendo que um 10o caso foi diagnosticado como NET tímico durante oseguimento. Análise de regressão logística multivariada permitiu a construção de um modelo de probabilidade predita baseado em cinco características clínicas (história familial presente/ausente; 45 anos < idade 45 anos; sexo, três ou dois tumores principais, tumor adrenal) úteis para predizer risco de presença/ausência de mutação MEN1 mediante um dado fenótipo na avaliação inicial de casos-índices diagnosticados clinicamente com MEN1. O uso de um painel NGS avaliando os principais genes associados com MEN1(-) MEN1 possibilitou uma definição mais rigorosa da nossa população garantindo que as MEN1(-) do presente estudo não tinham quaisquer mutações nestes genes conhecidos e fortalece a necessidade de mais estudos para investigar outros genes associados a este fenótipo. Nós discriminamos e refinamos diferenças fenotípicas e de evolução clínica entre casos-índices portadores de mutação germinativa MEN1 e MEN1(-) com ausência de mutações pelo painel de 6 genes. Foi possível reconhecer e revelar o risco isolado e integrado de diversos preditores clínicos de prenunciar tanto a ausência como a presença de mutação que nos permitiu construir um modelo de probabilidade predita de aplicação potencial na prática clínica que necessitará ser validado em outras populações. A análise completa de genes conhecidos pode auxiliar na identificação de casos-índices candidatos para estudos de exomas, discriminar melhor as diferenças de fenótipo entre casos com e sem mutações conhecidas eaperfeiçoar tanto o aconselhamento genético como o manejo clínico, seguimento e tratamento de casos-índices portadores de mutação e de MEN1(-)
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- Data da defesa: 17.08.2022
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo NÃO é de acesso aberto
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ABNT
CARVALHO, Rafael Arrabaça de. Avaliação de painel gênico expandido baseado em sequenciamento de nova geração aplicado à análise de correlações genótipo-fenótipo em neoplasia endócrina múltipla do tipo 1. 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-19012023-121121/. Acesso em: 28 jan. 2026. -
APA
Carvalho, R. A. de. (2022). Avaliação de painel gênico expandido baseado em sequenciamento de nova geração aplicado à análise de correlações genótipo-fenótipo em neoplasia endócrina múltipla do tipo 1 (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-19012023-121121/ -
NLM
Carvalho RA de. Avaliação de painel gênico expandido baseado em sequenciamento de nova geração aplicado à análise de correlações genótipo-fenótipo em neoplasia endócrina múltipla do tipo 1 [Internet]. 2022 ;[citado 2026 jan. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-19012023-121121/ -
Vancouver
Carvalho RA de. Avaliação de painel gênico expandido baseado em sequenciamento de nova geração aplicado à análise de correlações genótipo-fenótipo em neoplasia endócrina múltipla do tipo 1 [Internet]. 2022 ;[citado 2026 jan. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-19012023-121121/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.5.2022.tde-19012023-121121 (Fonte: oaDOI API)
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