Characterisation of the role of the ATR kinase homolog in L. major response to replication stress (2022)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, GABRIEL LAMAK ALMEIDA DA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- DOI: 10.11606/T.17.2022.tde-01122022-121302
- Subjects: LEISHMANIA; GENOMAS; REPLICAÇÃO DO DNA; DNA
- Keywords: ATR kinase; DNA damage response; DNA replication; Genome maintanence; Manutenção do genoma; Quinase ATR; Resposta ao dano no DNA
- Agências de fomento:
- Language: Inglês
- Abstract: As células eucarióticas desenvolveram mecanismos para manter e replicar seu genoma cuja integridade e transmissão são constantemente desafiadas por danos ao DNA e impedimentos da replicação. A proteína quinase Ataxia-Telangiectasia and Rad3-related (ATR), um membro da família phosphatidylinositol 3-kinase-like, garante a manutenção e a estabilidade do genoma, e é um dos principais reguladores da reposta a danos no DNA de eucariotos. Nesta tese de doutorado, eu investiguei a conservação e a relevância funcional do homologo da ATR no metabolismo do DNA de Leishmania major, um parasito protozoário com um singular genoma plástico. Usando o sistema de CRISPR/cas9 para edição do genoma nós conseguimos gerar uma linhagem com a quinase ATR fusionada a uma tag de Myc (MycATR); uma linhagem heterozigota para a deleção da região C-terminal da quinase com uma tagging de myc no N-terminal da proteína RPA1 (ATRΔC+/-mycRPA); e uma linhagem que expressa uma tag de Myc e homozigótica para a deleção da região C-terminal da ATR (mycATRΔC). Nossos resultados mostram que a localização da quinase ATR é dependente da região C-terminal e não é só limitada ao núcleo, mas também localizada no kinetoplasto e outra localização extranuclear. As células ATRΔC+/-mycRPA acumulam DNA de fita simples no kinetoplasto e no núcleo na presença ou não de hidroxiureia. Entretanto, o S-G2/M checkpoint parece ser perdido nas células mycATRΔC, levando a um acúmulo de células aberrantes e um aumento do conteúdo de DNA. A perda total da região C-terminal da ATR não afetou o programa de iniciação da replicação. De fato, ambas linhagens, mycATR and mycATRΔC, usam sítios alternativos de replicação para manter a replicação nas regiões internas do cromossomo. A região C-terminal da ATR também é importante para garantir a replicação das regiões sub-teloméricas sob estressereplicativo. Por fim, a perda total da região C-terminal da ATR quinase leva a um aumento do marcador de dano no DNA yH2A e de células aberrantes após estresse replicativo. Portanto, os resultados sugerem que a ATR de L. major é importante para o controle do ciclo celular, bem como para a manutenção do genoma sob estresse replicativo, prevenindo o acúmulo de fita simples de DNA no núcleo e no kinetoplasto, com também protegendo a replicação das regiões sub-teloméricas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 14.09.2022
- Este periódico é de acesso aberto
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
SILVA, Gabriel Lamak Almeida da. Characterisation of the role of the ATR kinase homolog in L. major response to replication stress. 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-01122022-121302/. Acesso em: 30 dez. 2025. -
APA
Silva, G. L. A. da. (2022). Characterisation of the role of the ATR kinase homolog in L. major response to replication stress (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-01122022-121302/ -
NLM
Silva GLA da. Characterisation of the role of the ATR kinase homolog in L. major response to replication stress [Internet]. 2022 ;[citado 2025 dez. 30 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-01122022-121302/ -
Vancouver
Silva GLA da. Characterisation of the role of the ATR kinase homolog in L. major response to replication stress [Internet]. 2022 ;[citado 2025 dez. 30 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-01122022-121302/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.17.2022.tde-01122022-121302 (Fonte: oaDOI API)
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